Сорбитол агар с МУГ HiMedia M1205-500G (уп/500 гр)

Питательная микробиологическая среда Сорбитол агар с МУГ HiMedia M1205-500G (уп/500 гр) производства HiMedia предназначена для выделения и идентификации энтеропатогенных штаммов Escherichia coli флуорогенным методом. Среда применяется при исследовании проб, связанных с диареей у детей, и позволяет дифференцировать микроорганизмы по ферментации сорбитола и образованию флуоресценции под длинноволновым УФ-излучением.

Назначение

Сорбитол агар с МУГ используют для выделения и идентификации энтеропатогенных Escherichia coli, связанных с диареей у детей, флуорогенным методом. Методика также применяется для обнаружения или дифференциации энтеропатогенных E. coli (EPEC) в воде.

Состав

Состав среды на 1 л:

• Конечный pH при 25 °C: 7,1 ± 0,2
• Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.
• Происхождение компонентов: животное.
• Тип продукта: стандартный.
• Физическая форма: порошок.
• Тип упаковки: HDPE.

Принцип действия и интерпретация результатов

Серотип Escherichia coli O157:H7 является патогенным для человека и связан с геморрагическим колитом. Большинство микроорганизмов фекальной флоры ферментируют сорбитол и образуют на этой среде розовые колонии.

Среда MUG Sorbitol Agar представляет собой модификацию агара МакКонки, в которой лактоза заменена сорбитолом. Сорбитол служит субстратом для определения его расщепления микроорганизмами, способными ферментировать сорбитол. Микроорганизмы, расщепляющие сорбитол, образуют колонии от розового до красного цвета; колонии, не ферментирующие сорбитол, остаются бесцветными.

Среди других штаммов E. coli энтеропатогенный штамм не способен расщеплять сорбитол в течение 48 ч инкубации. Кроме того, энтеропатогенный штамм не синтезирует фермент глюкуронидазу, поэтому в присутствии MUG не образуется флуоресценция.

MUG, или 4-метилумбеллиферил-β-D-глюкуронид, микроорганизмы, продуцирующие β-D-глюкуронидазу, превращают во флуоресцирующий продукт 4-метилумбеллиферон. Энтеропатогенные E. coli, в отличие от комменсальных штаммов E. coli, не синтезируют этот фермент, поэтому при облучении их колоний длинноволновым УФ-светом флуоресценция отсутствует.

Для усиления флуоресценции чашки с посевами обрабатывают парами аммиака. Флуоресценцию также можно визуализировать добавлением раствора NaOH.

Смесь желчных солей и кристаллический фиолетовый подавляют рост большинства грамположительных микроорганизмов, которые часто присутствуют в исследуемом материале.

Энтеропатогенные E. coli вызывают водянистую и кровянистую диарею. Водянистая диарея связана с прикреплением микроорганизмов и физическим нарушением целостности кишечника. Кровянистая диарея связана с прикреплением микроорганизмов и острым разрушением тканей, опосредованным токсином, известным как шигатоксин или веротоксин. Шигатоксин связан с клеткой, а не выделяется во внешнюю среду, поэтому обнаружение и дифференциация энтеропатогенных микроорганизмов имеют значение для санитарно-эпидемиологического контроля.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 50,13 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов, что соответствует приблизительно 0,10 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Тщательно перемешайте приготовленную среду.
5. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный легко сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,35%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель пурпурно-красного цвета.
• Реакция: реакция 5,01%-ного водного раствора при 25 °C.
• pH по реакции: 7,1 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,90–7,30.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Флуоресценцию можно визуализировать добавлением раствора NaOH или воздействием паров аммиака.

Ограничения и мешающие факторы

• При инкубации в атмосфере, обогащённой CO₂, некоторые представители семейства Enterobacteriaceae и Pseudomonas aeruginosa могут подавляться на этой среде.
• Цвет колоний, положительных по ферментации сорбитола, может выцветать, из-за чего такие колонии становится трудно отличить от колоний, отрицательных по ферментации сорбитола.
• Отличие EPEC от других групп патогенных E. coli, выделенных из образцов кала пациентов, включает серологические исследования и тесты на культурах клеток.

Условия хранения и срок годности

• Хранение сухой среды: при температуре ниже 30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение приготовленной среды: при 2–8 °C.
• Использование: до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Технические характеристики

• Артикул: M1205-500G.
• Форма поставки: упаковка 500 г.
• Назначение изделия: агар.
• Сертификат: ФСЗ 2009/03705.

Техническое отличие методики

В отличие от стандартного агара МакКонки, среда использует сорбитол вместо лактозы и дополнительно содержит MUG для флуорогенной дифференциации энтеропатогенных E. coli по активности β-D-глюкуронидазы.