Триптон-дрожжевой агар с бромкрезоловым пурпурным HiMedia M1193-500G (уп/500 гр)

Питательная среда Триптон-дрожжевой агар с бромкрезоловым пурпурным HiMedia M1193-500G (уп/500 гр) предназначена для выделения и количественного определения представителей семейства Enterobacteriaceae. Среда применяется для микробиологического контроля пищевых продуктов, молочных продуктов, воды, почвы и биологических образцов; изменение окраски индикатора происходит от пурпурной до жёлтой при кислой реакции.

Назначение

Триптон-дрожжевой агар с бромкрезоловым пурпурным применяется для выделения и количественного определения Enterobacteriaceae, а также для биохимического подтверждения ферментационных реакций выделенных микроорганизмов.

Среда предназначена для работы по методикам наиболее вероятного числа (MPN) и подсчёта колоний. Рецептура сформулирована в соответствии со спецификациями ISO 7402:1993.

Состав

Состав среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия эксплуатационным параметрам.

Принцип действия и интерпретация результатов

Enterobacteriaceae широко распространены в природе: встречаются в воде, почве, а также паразитируют на различных животных и растениях. Многие представители этой группы входят в состав нормальной кишечной микрофлоры человека. К семейству относятся патогенные микроорганизмы, включая Salmonella, Klebsiella и другие бактерии. Микроорганизмы могут загрязнять пищевые продукты и молочные продукты из природной среды и вызывать пищевые заболевания.

Ферментативный гидролизат казеина и дрожжевой экстракт обеспечивают среду азотистыми соединениями, витаминами группы B и другими питательными веществами для роста. Декстроза является сбраживаемым углеводом. Бромкрезоловый пурпурный выполняет функцию индикатора pH: в кислых условиях окраска среды изменяется с пурпурной на жёлтую. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.

Количественное определение Enterobacteriaceae выполняют одним из двух методов:

• методом наиболее вероятного числа (MPN);
• методом подсчёта колоний.

Биохимическое исследование проводят посевом на триптон-дрожжевой агар с бромкрезоловым пурпурным для оценки ферментационных реакций.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию из 41,52 г сухой среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения компонентов среды.
3. Простерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Разлейте стерильную среду по пробиркам.
5. Охладите среду в пробирках в наклонном положении для формирования скошенной поверхности.

Методика определения методом наиболее вероятного числа

1. Внесите 10 мл исследуемой пробы или 10 мл исходной суспензии в 3 пробирки со средой EE Broth двойной концентрации (M2871).
2. Внесите по 1 мл пробы в 3 пробирки со средой EE Broth одинарной концентрации (M2871).
3. Ещё в 3 пробирки со средой EE Broth одинарной концентрации (M287I) внесите по 1 мл первого десятичного разведения исследуемой пробы (10⁻¹).
4. Инкубируйте все 9 пробирок при температуре 35–37 °C в течение 24 ч.
5. Пересевите петлёй материал из каждой пробирки на фиолетово-красный желчный глюкозный агар без лактозы (VRBGA без лактозы, M581).
6. Инкубируйте чашки при температуре 35–37 °C в течение 24 ч.
7. После инкубации отберите предположительно типичные колонии: от красных до розовых или бесцветные слизистые колонии.
8. Подтвердите принадлежность выделенных микроорганизмов биохимическими методами.

Методика подсчёта колоний

1. Перенесите по 1 мл исследуемой пробы в две стерильные чашки Петри.
2. В ещё две стерильные чашки Петри перенесите по 1 мл первого десятичного разведения исследуемой пробы.
3. Повторите процедуру для последующих разведений.
4. В каждую чашку Петри асептически внесите по 15 мл стерильной охлаждённой среды VRBGA без лактозы (M581).
5. Перемешайте содержимое чашек и охладите.
6. После полного затвердевания среды нанесите покровный слой объёмом 10–15 мл стерильной среды VRBGA без лактозы (M581), охлаждённой до 45–50 °C.
7. Дождитесь затвердевания покровного слоя.
8. Инкубируйте чашки при температуре 35–37 °C в течение 24 ч.
9. Отберите предположительно типичные колонии в соответствии с процедурой метода наиболее вероятного числа.
10. Подтвердите выделенные колонии биохимически.

Технические характеристики

• Назначение изделия: агар
• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,80–7,20
• Сертификат: ФСЗ 2009/03707

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, свободно текучий порошок от кремового до бледно-зелёного цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенного агара образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель пурпурного цвета.

Реакция среды

Реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 4,15 % при температуре 25 °C:

• pH: 7,0 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определены после инкубации при температуре 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Условия хранения и срок годности

• Условия хранения сухой среды: при температуре ниже 30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Условия хранения приготовленной среды: при температуре 2–8 °C.
• Срок использования: до даты истечения срока годности, указанной на этикетке.

Сравнительное техническое отличие

Среда сочетает питательную основу на базе ферментативного гидролизата казеина и дрожжевого экстракта с декстрозой и индикатором бромкрезоловым пурпурным, что позволяет оценивать ферментационные реакции по изменению окраски среды.

Применяемые среды и реагенты

Для выполнения методик используются:

• EE Broth двойной концентрации, M2871;
• EE Broth одинарной концентрации, M2871;
• EE Broth одинарной концентрации, M287I;
• VRBGA без лактозы, M581.