Основа сывороточной среды Лёффлера HiMedia M1189-500G (уп/500 гр)

Основа питательной среды Основа сывороточной среды Лёффлера HiMedia M1189-500G (уп/500 гр) — порошковый компонент с конечным pH 7,6 ± 0,2. Применяется для культивирования Corynebacterium diphtheriae из тканевых, носовых и зевных клинических образцов, при этом для селективного выделения коринебактерий используется параллельно с сывороточно-теллуритным агаром.

Назначение

Основа сывороточной среды Лёффлера рекомендована для культивирования Corynebacterium diphtheriae. Среда Лёффлера повышает эффективность первичного и вторичного выделения и культивирования требовательных патогенных микроорганизмов, особенно из образцов из носа и зева.

Среду также применяют для:

• восстановления вирулентности и других идентификационных свойств микроорганизмов, включая микроскопические и колониальные признаки, утраченных после длительной инкубации или многократных пересевов;
• выявления пигментации;
• выявления аскоспор;
• определения протеолитической активности микроорганизмов;
• наблюдения характерной клеточной морфологии видов Corynebacterium и метахроматических гранул.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Эквивалент: настой сердечной мышцы.

Принцип действия и интерпретация

Corynebacterium diphtheriae, также называемая бациллой Клебса—Лёффлера, представляет собой грамположительную, неинкапсулированную, неспорообразующую, неподвижную факультативно-анаэробную бактерию. Микроорганизм вызывает у человека инфекцию, приводящую к дифтерии, которая характеризуется воспалительным поражением и образованием плёнчатого экссудата на слизистой оболочке верхних дыхательных путей.

В мазках из влажного скошенного слоя сывороточной среды Лёффлера C. diphtheriae может образовывать большое количество волютина. Для индукции характерного обильного образования гранул у C. diphtheriae требуется предварительное культивирование на агаре Лёффлера.

Высокое содержание сыворотки позволяет определять протеолитическую активность микроорганизмов. Пептон, настой HMH и бычья сыворотка обеспечивают аминокислотами и другими сложными азотистыми соединениями, необходимыми для роста Corynebacterium. Декстроза служит источником сбраживаемых углеводов и энергии. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды.

Тип образцов

Клинические образцы:

• ткань;
• образцы из носа;
• образцы из зева.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 10,0 г порошка в 250 мл очищенной или дистиллированной воды при температуре 45 °C.
2. Добавьте 750 мл стерильной бычьей сыворотки.
3. Тщательно перемешайте.
4. Разлейте среду по пробиркам.
5. Коагулируйте и стерилизуйте среду одним из способов:
   • выдерживанием при температуре 80–90 °C в течение 15 мин;
   • обработкой паром при температуре 100 °C в течение 10–15 мин.

Методика работы с образцами и культурами

1. Натрите тампоном непосредственно поверхность среды.
2. После инкубации приготовьте мазки с поверхности скошенного слоя среды.
3. Для определения протеолиза внесите посев на скошенный слой и до начала инкубации залейте скошенный слой бульоном Брюэра-тиогликолятом HiVeg™™ (MV019).
4. Инкубируйте в течение 3–4 суток или дольше — до появления признаков протеолиза.
5. Используйте среду Лёффлера параллельно с сывороточно-теллуритным агаром для селективного выделения Corynebacterium.
6. После инкубации исследуйте культуры и мазки, окрашенные метиленовым синим Лёффлера.
7. Оцените характерную клеточную морфологию видов Corynebacterium и наличие метахроматических гранул, окрашивающихся метиленовым синим.
8. Пересевайте на кровяной агар колонии, положительные по каталазе и имеющие типичную морфологию, для проведения процедур идентификации.
9. Оцените пигментацию специфичных микроорганизмов:
   • Pseudomonas aeruginosa — зелёная;
   • Staphylococcus aureus — от жёлтой до золотистой.
10. Протеолитическую активность определяйте по разрушению целостности коагулированной среды.

Ограничения

Образование метахроматических гранул характерно для видов Corynebacterium, однако окрашенные гранулы, сходные с гранулами Corynebacteria, могут также выявляться у других микроорганизмов, включая Propionibacterium, Actinomyces и плеоморфные штаммы стрептококков.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до коричневато-жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базальная среда: прозрачный раствор светло-янтарного цвета.
• После добавления конской сыворотки и коагуляции: в пробирках образуются опалесцирующие скошенные слои от почти белого цвета.

Реакция среды

Реакция базальной среды: 10 г порошка в 250 мл дистиллированной воды при 25 °C.

• pH: 7,6 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,40–7,80.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления стерильной бычьей сыворотки и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

Примечание: соответствующие номера WDCM.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом состоянии, чтобы предотвратить образование комков вследствие гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывать контейнер.
• Рабочие характеристики продукта обеспечиваются при использовании в течение указанного срока годности и соблюдении рекомендованных условий хранения.

Требования безопасности

• Только для диагностики вне организма.
• Только для профессионального применения.
• Перед вскрытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы.
• При работе с клиническими образцами соблюда