HiMedia M1189-100G Основа сывороточной среды Лёффлера

Основа сывороточной среды Лёффлера HiMedia M1189-100G предназначена для культивирования Corynebacterium diphtheriae. Среда используется для первичной и вторичной изоляции требовательных патогенных микроорганизмов из мазков носа и горла, а также для восстановления вирулентности и идентификации свойств возбудителя.

Область применения

Среда рекомендуется для выращивания Corynebacterium diphtheriae (бациллы Клебса-Лёффлера) — грамположительного, неинкапсулированного, неспорообразующего и неподвижного факультативного анаэроба. Применяется для диагностики дифтерии, характеризующейся воспалительными поражениями и мембранозными экссудатами слизистой верхних дыхательных путей.

Типы исследуемых образцов

• Клинические образцы: ткани, мазки из носа и горла.

Принцип измерения и интерпретация

Среда Лёффлера способствует усилению первичной и вторичной изоляции патогенов, восстанавливает их вирулентность и колониальные/микроскопические свойства, утраченные при длительном инкубировании или повторном пересеве. Также используется для демонстрации пигментации и аскоспор.

• Компоненты: Пептон, настой сердечной мышцы (HMH) и бычья сыворотка обеспечивают аминокислоты и сложные азотистые вещества для роста Corynebacterium. Декстроза служит источником ферментируемых углеводов и энергии. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс.
• Интерпретация: Высокое содержание сыворотки позволяет определить протеолитическую активность организмов. На влажных скосах среды Лёффлера C. diphtheriae демонстрируют обильное содержание волютина. Для индукции характерных гранул в C. diphtheriae требуется предварительное культивирование на данной среде.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 10,0 г порошка в 250 мл очищенной или дистиллированной воды при температуре 45 °C.
2. Добавьте 750 мл стерильной бычьей сыворотки, тщательно перемешайте и разлейте по пробиркам.
3. Проведите коагуляцию и стерилизацию методом инсписсации (нагрев) в течение 15 минут при температуре 80–90 °C или пропариванием при 100 °C в течение 10–15 минут.

Процедура посева и анализа

1. Проведите посев, растирая тампон непосредственно по поверхности среды.
2. После инкубации приготовьте мазки с поверхности скоса.
3. Для тестирования протеолиза инокулируйте скос и перед инкубацией залейте его средой Brewer Thioglycollate HiVeg™ (MV019). Инкубация для проявления протеолиза может длиться 3–4 дня или дольше.
4. Среду Лёффлера следует использовать параллельно с сывороточно-теллуритным агаром для селективной изоляции Corynebacterium.
5. Окрасьте мазки метиленовым синим по Лёффлеру. Оцените клеточную морфологию и наличие метахроматических гранул.
6. Колонии, которые являются каталаза-положительными и имеют типичную морфологию, пересейте на кровяной агар для дальнейшей идентификации.
7. Оцените пигментацию специфических организмов: Pseudomonas aeruginosa (зелёный) и Staphylococcus aureus (от жёлтого до золотистого).
8. Протеолитическая активность подтверждается разрушением целостности коагулированной среды.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Общие характеристики

Контроль качества

Внешний вид и реакция

• Порошок: однородный свободнотекущий порошок от светло-жёлтого до коричневато-жёлтого цвета.
• Базальная среда: прозрачный раствор светло-янтарного цвета.
• После добавления сыворотки и коагуляции: в пробирках образуются опалесцирующие скосы грязно-белого цвета.
• Реакция (pH): 7,40–7,80 (базальная среда 10 г в 250 мл дистиллированной воды при 25 °C: 7,6 ± 0,2).

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются с добавлением стерильной бычьей сыворотки после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 часов.

Ограничения и предостережения

• Ограничения: Метахроматические гранулы характерны для видов Corynebacterium, однако другие организмы, такие как Propionibacterium, Actinomyces и плеоморфные штаммы стрептококков, могут иметь окрашенные гранулы, напоминающие гранулы Corynebacteria.
• Меры предосторожности: Только для диагностики in vitro. Только для профессионального использования. Использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица). Соблюдать стандартные правила работы с клиническими образцами и культурами.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре +10…+30 °C в сухом вентилируемом месте, вдали от источников возгорания. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать флакон для предотвращения комкования.
• Хранение готовой среды: при температуре +2…+8 °C.
• Утилизация: использованные или непригодные препараты подлежат безопасному удалению путем автоклавирования и/или сжигания в соответствии с лабораторными протоколами по деконтаминации инфекционных материалов.