HiMedia M1189-100G Основа сывороточной среды Лёффлера

Порошковая питательная среда HiMedia M1189-100G Основа сывороточной среды Лёффлера с конечным pH 7,6 ± 0,2. Основа предназначена для культивирования Corynebacterium diphtheriae и готовится с добавлением 750 мл стерильной бычьей сыворотки на 10,0 г порошка.

Назначение

Основа сывороточной среды Лёффлера предназначена для первичного и вторичного выделения и культивирования Corynebacterium diphtheriae, особенно из образцов из носа и зева. Среда также применяется для восстановления вирулентности и других идентификационных свойств микроорганизмов после длительной инкубации или многократных пересевов, выявления пигментации и аскоспор, а также определения протеолитической активности.

Рекомендуемый материал:

• ткань;
• образцы из носа;
• образцы из зева.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Основа эквивалентна настою сердечной мышцы.

Принцип действия и интерпретация

Corynebacterium diphtheriae, также называемая бациллой Клебса—Лёффлера, представляет собой грамположительную, неинкапсулированную, неспорообразующую, неподвижную факультативно-анаэробную бактерию. Микроорганизм вызывает у человека инфекционное заболевание — дифтерию, для которой характерны воспалительное поражение и образование плёнчатого экссудата на слизистой оболочке верхних дыхательных путей.

Corynebacterium diphtheriae может образовывать большое количество волютина в мазках с влажного скошенного участка сывороточной среды Лёффлера. Для индукции характерного обильного образования гранул у Corynebacterium diphtheriae требуется предварительное культивирование на агаре Лёффлера.

Высокое содержание сыворотки позволяет определять протеолитическую активность микроорганизмов. Пептон, настой HMH и бычья сыворотка обеспечивают аминокислоты и другие сложные азотсодержащие вещества, необходимые для роста Corynebacterium. Декстроза служит источником сбраживаемых углеводов и энергии. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 10,0 г порошка в 250 мл очищенной или дистиллированной воды при температуре 45 °C.
2. Добавьте 750 мл стерильной бычьей сыворотки.
3. Тщательно перемешайте.
4. Разлейте среду по пробиркам.
5. Коагулируйте и стерилизуйте среду прогреванием в течение 15 мин при 80–90 °C либо обработкой паром при 100 °C в течение 10–15 мин.

Методика работы с образцами

1. Натрите тампоном непосредственно поверхность приготовленной среды.
2. После инкубации приготовьте мазки с поверхности скошенного участка.
3. Для определения протеолиза инокулируйте скошенный участок и до начала инкубации залейте его тиогликолевой средой Brewer HiVeg™ (MV019).
4. Инкубируйте посевы в течение 3–4 суток или дольше — до появления признаков протеолиза.
5. Используйте среду Лёффлера параллельно с теллуритовым агаром с сывороткой для селективного выделения Corynebacterium.
6. После инкубации исследуйте культуры и мазки, окрашенные метиленовым синим Лёффлера.
7. Оцените типичную клеточную морфологию видов Corynebacterium и наличие метахроматических гранул, поглощающих метиленовый синий.
8. Колонии, положительные по каталазе и демонстрирующие типичную морфологию, пересейте на кровяной агар для проведения процедур идентификации.
9. Оцените пигментацию отдельных микроорганизмов: зелёную у Pseudomonas aeruginosa и жёлтую или золотистую у Staphylococcus aureus.
10. Протеолитическая активность проявляется разрушением целостности коагулированной среды.

Ограничения применения

Образование метахроматических гранул характерно для видов Corynebacterium, однако окрашенные гранулы, сходные с гранулами коринебактерий, могут выявляться также у других микроорганизмов, включая Propionibacterium, Actinomyces и плеоморфные штаммы стрептококков.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: M1189-100G
• Назначение: основа сывороточной среды
• Масса: 100 г
• Конечный pH: 7,6 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,40–7,80

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до желтовато-коричневого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Основная среда: прозрачный раствор светло-янтарного цвета.
• После добавления лошадиной сыворотки и коагуляции: в пробирках образуются опалесцирующие скошенные участки не совсем белого цвета.

Реакция среды

Реакция основной среды определяется для 10 г порошка, растворённых в 250 мл дистиллированной воды, при 25 °C.

• pH: 7,6 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,40–7,80.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации с добавлением стерильной бычьей сыворотки при 35–37 °C в