HiMedia M1146-100G C.L.E.D. агар без индикатора

Питательная агаровая среда HiMedia M1146-100G C.L.E.D. агар без индикатора — порошкообразная среда для микробиологического анализа мочи с конечным pH 7,3 ± 0,2. Применяется для выделения, количественного определения и предварительной идентификации бактериальной флоры мочевыводящих путей; для приготовления среды требуется добавление регидратированного модуля бромтимолового синего FD091.

Назначение

Среда предназначена для выделения, количественного определения и предварительной идентификации бактериальной флоры мочевыводящих путей. Основной тип клинического образца — моча.

Среда C.L.E.D. (цистин-лактозная электролит-дефицитная среда) поддерживает рост всех основных возбудителей инфекций мочевыводящих путей и может применяться:

• в бактериологическом исследовании мочи;
• для количественной оценки бактериурии;
• в процедурах с использованием тест-полосок;
• в качестве транспортной среды для образцов мочи при посеве погружением.

Состав

* Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с установленными параметрами эффективности. HM Peptone B эквивалентен мясному экстракту.

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация

На твёрдой питательной среде роение бактерий рода Proteus можно контролировать ограничением содержания электролитов. Ранее для подавления роения Proteus в среды добавляли спирт, поверхностно-активные вещества, азид натрия, борную кислоту и другие компоненты.

Позднее среда Сэндиса была модифицирована Макки и Сэндисом: маннит заменили лактозой и сахарозой, а также повысили концентрации агара и бромтимолового синего. В дальнейшем те же авторы исключили сахарозу и включили L-цистин для стимуляции роста карликовых колоний колиформных бактерий, зависимых от цистина. Полученная формула получила название C.L.E.D. — Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient, то есть цистин-лактозная электролит-дефицитная среда.

Пептон, HM Peptone B и триптон обеспечивают источники азота и углерода, длинноцепочечные аминокислоты, витамины и другие необходимые для роста питательные вещества. Лактоза является сбраживаемым сахаром. L-цистин поддерживает рост карликовых колиформных колоний. Бромтимоловый синий служит индикатором pH и приобретает жёлтую окраску в кислой среде.

Бактериурию можно количественно оценивать путём инокуляции поверхности агаровой среды соответствующим разведением образца. Посев выполняют сразу после сбора мочи. Также допускается инокуляция калиброванной петлёй или методом заливочных чашек с дублированным разведением.

Shigella может не расти на этой среде. Начало антибиотикотерапии до сбора образца и низкий pH мочи — менее 5 — могут приводить к заниженному числу бактерий у инфицированных пациентов.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 36,1 г порошка в 998 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Добавьте регидратированное содержимое одного флакона добавки бромтимолового синего FD091.
3. Нагрейте смесь до кипения для полного растворения среды.
4. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (ориентировочно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Пробоподготовка и инокуляция

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно действующим лабораторным процедурам и установленным руководствам.

Инокулируйте среду непосредственно после сбора мочи. Для количественного определения бактериурии используйте соответствующее разведение образца, калиброванную петлю или метод заливочных чашек с дублированным разведением.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют на среде с добавленной добавкой бромтимолового синего FD091 после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

При добавлении добавки бромтимолового синего FD091 в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель зелёного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 3,61 % при 25 °C:

• pH: 7,3 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,10–7,50.

Технические характеристики

• Наименование: C.L.E.D. агар без индикатора.
• Артикул: M1146-100G.
• Производитель: HiMedia.
• Назначение изделия: агаровая питательная среда.
• Форма выпуска: порошок.
• Масса: 100 г.
• Происхождение компонентов: животное.
• Тип продукта: стандартный.
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE).
• Рабочая температура хранения невскрытого продукта: 10–30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,10–7,50.
• Добавка для приготовления среды: бромтимоловый синий FD091.

Ограничения применения

1. Среда рекомендована для исследования инфекций мочевыводящих путей. Низкое количество бактерий в моче может быть связано с антибиотикотерапией или низким pH мочи.
2. Выделение микроорганизмов зависит от их количества в образце мочи.
3. Посев необходимо выполнять непосредственно после сбора мочи.
4. Shigella может не расти на этой среде.
5. Для получения корректных результатов среду не следует инкубировать более 24 ч. При преобладании бактерий, сбраживающих лактозу, вся среда может пожелтеть, что маскирует присутствие бактерий, не сбраживающих лактозу.

Условия хранения и срок годности

Храните продукт при температуре 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости. Приготовленную среду храните при 2–8 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде. Порошок гигроскопичен; при попадании влаги возможно образование комков. Неправильное хранение также может привести к комкованию.

Храните продукт в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После каждого использования плотно закрывайте ёмкость. Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение указанного срока годности.

Меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо обеззараживать автоклавированием и/или уничтожать сжиганием. При утилизации инфекционных материалов соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Условия эффективности

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при приготовлении и применении согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.