HiMedia M1145F-500G Основа агара Листерия Оксфорд с 1.2% агара

Основа сухой питательной среды HiMedia M1145F-500G Листерия Оксфорд с 1,2 % агара для изоляции видов Listeria из пищевых образцов. Применяется в соответствии с методикой FDA BAM (1998); вес упаковки составляет 500 г.

Принцип измерения и интерпретация

Среда предназначена для селективного выделения и идентификации видов рода Listeria, в частности патогенного для человека Listeria monocytogenes.

Принцип работы основан на гидролизе эскулина: L. monocytogenes гидролизует эскулин до эскулетина и декстрозы. Эскулетин взаимодействует с ионами железа (из аммонийного цитрата железа), что приводит к образованию чёрных зон вокруг колоний.

Функции компонентов:

• Специальный пептон: источник основных питательных веществ.
• Кукурузный крахмал: нейтрализация токсичных метаболитов.
• Хлорид лития: ингибирование грам-отрицательных бактерий и большинства грам-положительных микроорганизмов (некоторые штаммы стафилококков могут расти, образуя эскулин-отрицательные колонии).
• Селективные добавки (например, модифицированная добавка CM FD126F): подавление роста сопутствующей микрофлоры.

Методика проведения анализа

Пробоподготовка и обогащение

Для проб пищевых продуктов (молоко и молочные продукты) используют селективное обогащение:

1. Образец массой или объёмом 25 г/мл помещают в 225 мл буферного бульона для обогащения листерий (M1578).
2. Гомогенизируют и тщательно перемешивают.
3. Инкубируют 4 часа при 30 °C.
4. Через 4 часа добавляют селективные агенты (FD063I), содержащие налидиксовую кислоту, циклогексимид и гидрохлорид акрифлавина.
5. Продолжают инкубацию в течение 48 часов при 30 °C.

Посев и идентификация

1. Обогащенные культуры высевают штрихом на основу среды Листерия Оксфорд через 24 и 48 часов инкубации.
2. Инкубируют в аэробных условиях 24–48 часов при 35 °C.
3. Выбирают 5 типичных чёрных колоний (эскулин-положительных) и пересевают их на агар с триптон-соевым дрожжевым экстрактом (M1214/M1214F).
4. Инкубируют 24–48 часов при 30 °C.
5. Подтверждают наличие колоний с помощью освещения по методу Генри (Henrys illumination light).

Приготовление среды

1. Суспендировать 28,75 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревать до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C и асептически добавить содержимое одного флакона модифицированной селективной добавки CM (FD126F).
5. Тщательно перемешать перед розливом в стерильные чашки Петри.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,2 $\pm$ 0,1.

Общие параметры

Контроль качества

• Внешний вид: гомогенный свободнотекущий порошок от светло-жёлтого до тёмно-жёлтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,2 % агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: тёмно-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель с синеватым оттенком.
• Реакция 5,75 % водного раствора при 25 °C: pH 7,2 $\pm$ 0,1.
• Диапазон pH: 7,10–7,30.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при использовании модифицированной селективной добавки CM (FD126F) после инкубации при 35 °C в течение 24–48 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия плотно закрывать флакон для предотвращения комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Ограничения и меры предосторожности

• Для окончательной идентификации изолированных микроорганизмов требуются дополнительные биохимические тесты.
• Рост отдельных штаммов может варьироваться в зависимости от их индивидуальных требований.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте стандартные правила микробиологической безопасности, используйте средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица).
• Утилизация: использованные среды подлежат автоклавированию или сжиганию в соответствии с лабораторными протоколами по обращению с инфекционными материалами.