HiMedia M1145F-500G Основа агара Листерия Оксфорд с 1.2% агара

Питательная среда HiMedia M1145F-500G «Основа агара Листерия Оксфорд с 1,2 % агара» — порошковая основа массой 500 г для микробиологических исследований. Применяется для выделения видов Listeria из пищевых проб; для окончательной идентификации изолированных микроорганизмов требуются дополнительные биохимические тесты.

Назначение

Основа агара Листерия Оксфорд рекомендуется для выделения видов Listeria из пищевых проб. Методика предназначена для работы с пищевыми и экологическими образцами и предусматривает селективное обогащение с последующим высевом на дифференциально-селективную среду.

Применение описано для методики FDA BAM 1998 — Бактериологического аналитического руководства Управления по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США.

Состав

Состав на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных эксплуатационных параметров.

Принцип действия и интерпретация результатов

Род Listeria включает шесть видов: L. monocytogenes, L. innocua, L. seeligeri, L. welshimeri, L. ivanovii и L. grayi. Listeria monocytogenes — единственный вид рода Listeria, имеющий существенное значение как патоген человека. L. monocytogenes широко распространена в пищевых продуктах и может присутствовать в производственной среде пищевых предприятий, включая контактирующие с пищей поверхности и оборудование.

Виды Listeria seeligeri, Listeria welshimeri и Listeria ivanovii связаны с заболеваниями животных. L. ivanovii и L. monocytogenes патогенны для мышей и других животных. При этом с листериозом человека обычно связывают только L. monocytogenes; инфекции человека, вызванные L. ivanovii и даже L. seeligeri, крайне редки.

Предпочтительная стандартная методика и разрешённые альтернативные ускоренные методики выявления и выделения Listeria monocytogenes предусматривают следующие этапы:

1. Отбирают пробы предположительно контаминированных партий пищевой продукции. При необходимости объединяют подпробы в соответствии с инструкциями полевой лаборатории FDA.
2. Аналитические навески массой 25 г предварительно обогащают для выделения видов Listeria при 30 °C в течение 4 ч в буферном бульоне для обогащения Listeria BLEB (M1578), эквивалентном основе бульона для обогащения молочных продуктов AOAC/IDF с пируватом натрия.
3. На четвёртом часу инкубации добавляют селективные агенты: акрифлавин — 10 мг/л, налидиксовую кислоту натрия — 40 мг/л и, при необходимости, противогрибковый компонент, например циклогексимид — 50 мг/л.
4. Селективное обогащение продолжают при 30 °C до общей продолжительности инкубации 48 ч.
5. Культуру обогащения высевают штриховым методом через 24 и 48 ч на одну из предписанных дифференциально-селективных агарищ для выделения видов Listeria.
6. Селективные и дифференциальные среды, содержащие эскулин и цитрат железа, обеспечивают выделение и выявление Listeria на основании гидролиза эскулина.

Основа среды Листерия Оксфорд разработана на основе состава, описанного Curtis и соавторами, для селективного выделения L. monocytogenes из пищевых образцов.

Специальный пептон служит источником необходимых питательных веществ для микроорганизмов. Кукурузный крахмал нейтрализует образующиеся токсичные метаболиты. Хлорид лития и антибиотики подавляют грамотрицательные бактерии и большинство грамположительных микроорганизмов, однако отдельные штаммы стафилококков могут образовывать колонии, отрицательные по эскулину. Сульфат колистина, мокса­лактам и хлорид лития подавляют бактерии, не относящиеся к видам Listeria. В качестве альтернативы можно использовать модифицированную селективную добавку CM (FD126F), подавляющую как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии.

L. monocytogenes гидролизует эскулин до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с ионами железа, в результате чего вокруг колоний образуются чёрные зоны.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 28,75 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое 1 флакона модифицированной селективной добавки CM (FD126F).
6. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Тип образца

• Пищевые образцы.

Отбор и обработка образцов

Для пищевых и экологических образцов обычно применяют селективное обогащение.

При выделении Listeria из пищевых продуктов, включая молоко и молочные продукты:

1. Внесите 25 мл или 25 г образца в 225 мл буферного бульона для обогащения Listeria (M1578).
2. Тщательно гомогенизируйте и перемешайте образец.
3. Инкубируйте в течение 4 ч при 30 °C.
4. Через 4 ч добавьте селективные агенты FD063I, содержащие налидиксовую кислоту, циклогексимид и гидрохлорид акрифлавина, для повышения селективности.
5. Продолжайте инкубацию в течение 48 ч при 30 °C.
6. Высевайте обогащённые культуры на основу среды Листерия Оксфорд через 24 и 48 ч.
7. Инкубируйте в аэробных условиях в течение 24–48 ч при 35 °C.
8. Отберите 5 типичных эскулин-положительных колоний, имеющих чёрную окраску, и инокулируйте триптон-соевый дрожжевой агар M1214/M1214F.
9. Инкубируйте в течение 24–48 ч при 30 °C.
10. Подтвердите принадлежность колоний с использованием освещения по Генри.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: M1145F-500G
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Физическая форма: порошок
• Масса: 500 г
• Упаковка: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Содержание агара в готовой среде: 1,2 %
• Конечное значение pH при 25 °C: 7,2 ± 0,1
• Диапазон pH: 7,10–7,30
• Температура хранения сухого препарата: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до тёмно-жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель тёмно-янтарного цвета с голубоватым оттенком.

Реакция среды

Реакция 5,75%-ного водного раствора при 25 °C: pH 7,2 ± 0,1.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определены с добавлением модифицированной селективной добавки CM (FD126F) после инкубации при 35 °C в течение 24–48 ч.