HiMedia M1145-100G Основа среды Листерия Оксфорд

Порошкообразная основа питательной среды HiMedia M1145-100G Основа среды Листерия Оксфорд массой 100 г, предназначенная для выделения видов Listeria из патологических образцов. Среда применяется для анализа клинических, пищевых и молочных образцов и используется с оксфордской селективной добавкой FD071 или селективной добавкой CM FD126 после стерилизации автоклавированием.

Назначение и область применения

Основа среды Листерия Оксфорд рекомендована для выделения видов Listeria из патологических образцов.

Типы образцов:

• клинические образцы: ткани и биологические жидкости;
• пищевые и молочные образцы.

Среда основана на рецептуре Curtis et al. для выделения Listeria monocytogenes из клинических и пищевых образцов.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2
• Концентрация водного раствора для контроля реакции: 5,55 % масса/объём

Принцип действия и интерпретация

Listeria monocytogenes — единственный вид рода Listeria, имеющий значение как возбудитель заболеваний человека. Listeria seeligeri, Listeria welshimeri и Listeria ivanovii связывают с заболеваниями животных. Все виды рода Listeria могут быть патогенны для овец и крупного рогатого скота.

Положительная диагностика листериоза возможна только при выделении и культивировании возбудителя из образцов крови или ликвора поражённых организмов.

Специальный пептон служит источником необходимых питательных веществ для микроорганизмов. Кукурузный крахмал нейтрализует токсичные метаболиты, образующиеся в процессе роста. Хлорид лития и антибиотики подавляют грамотрицательные бактерии и большинство грамположительных микроорганизмов, однако некоторые штаммы стафилококков могут расти в виде колоний, отрицательных по гидролизу эскулина.

Циклогексимид снижает грибковую контаминацию. Цефотетан и фосфомицин подавляют избыточный рост бактерий. Акрифлавин, сульфат колистина и хлорид лития подавляют бактерии, не относящиеся к видам Listeria. В качестве альтернативы можно добавлять селективную добавку CM FD126, подавляющую как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии.

L. monocytogenes гидролизует эскулин до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с ионами железа, в результате чего вокруг колоний образуются чёрные зоны.

Селективность среды достаточна для выделения и дифференциации микроорганизмов при прямом поверхностном посеве. При этом рекомендуется предварительно разводить посевной материал; предварительное разведение особенно необходимо при высокой загрязнённости образца.

Методика выделения зависит от исследуемого материала. Для всех образцов рекомендуется селективное и холодовое обогащение.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 27,75 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм и температуре 121 °C в течение 15 мин. Давление 15 фунтов на квадратный дюйм соответствует примерно 0,103 МПа.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона оксфордской селективной добавки FD071 или одного флакона селективной добавки CM FD126.
6. Тщательно перемешайте среду.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика выделения из клинических и биологических образцов

Для фекальных и биологических образцов:

1. Гомогенизируйте образец в 0,1%-й пептонной воде M028.
2. Возьмите 0,1 мл подготовленного образца.
3. Нанесите образец непосредственно на селективную среду для Listeria или внесите его в бульон для селективного обогащения.
4. Инкубируйте посевы в течение 7 суток при 30 °C.
5. Перенесите материал на селективную среду для Listeria.

Методика выделения из пищевых и экологических образцов

Для пищевых и экологических образцов обычно применяют селективное обогащение.

Для выделения Listeria из пищевых продуктов, включая молоко и молочные продукты:

1. Внесите 25 мл или 25 г образца в 225 мл бульона для обогащения Listeria UVM M890A.
2. Тщательно гомогенизируйте и перемешайте образец.
3. Инкубируйте в течение 48 ч при 30 °C.
4. Выполните посев обогащённой культуры штриховым методом на оксфордскую среду для Listeria.
5. Инкубируйте аэробно в течение 48 ч при 37 °C.
6. Отберите 5 типичных колоний, положительных по гидролизу эскулина.
7. Перенесите колонии на соево-казеиновую переваренную среду M290.
8. Инкубируйте в течение 24 ч.
9. Используйте полученные колонии для биохимического подтверждения.

Технические характеристики

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления оксфордской селективной добавки FD071 или селективной добавки CM FD126 и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.