Агар Бэрда-Паркера с сульфаметазином HiMedia M1140-500G (уп/500 гр)

Питательная микробиологическая среда Агар Бэрда-Паркера с сульфаметазином HiMedia M1140-500G (уп/500 гр) — порошковая основа для выделения и количественного определения коагулазоположительных стафилококков, включая Staphylococcus aureus, из пищевых и других материалов. Среда применяется при анализе пищевых и молочных образцов; рабочий раствор готовят из 63,05 г порошка на 950 мл очищенной или дистиллированной воды с последующим добавлением эмульсии яичного желтка и теллурита калия.

Назначение

Агар Бэрда—Паркера с сульфаметазином предназначен для выделения и количественного определения коагулазоположительных стафилококков из пищевых продуктов, молочных образцов и других материалов. Идентификация выделенного Staphylococcus aureus должна подтверждаться реакцией на коагулазу.

Среду также можно использовать для выявления коагулазной активности при добавлении плазмы фибриногена. Для количественного анализа выбирают чашки с 20–200 колониями, подсчитывают колонии, типичные для Staphylococcus aureus, и проверяют их на коагулазную реакцию; результат выражают как количество Staphylococcus aureus на грамм пищевого продукта.

Состав

Состав на 1 л среды:

Пептон HM B# эквивалентен мясному экстракту.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров рабочих характеристик.

• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2
• Происхождение: животное
• Физическая форма: порошок
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 63,05 г порошка в 950 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (ориентировочно ≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 50 мл концентрированной эмульсии яичного желтка FD045 и 3 мл стерильного 3,5%-ного раствора теллурита калия FD047 либо 50 мл эмульсии яичного желтка с теллуритом FD046.
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Агар Бэрда—Паркера разработан Бэрдом—Паркером на основе теллурит-глициновой рецептуры Zebovitz и предназначен для выделения и количественного определения стафилококков в пищевых продуктах и других материалах с дифференциацией коагулазоположительных штаммов.

Между результатом коагулазного теста и появлением прозрачной зоны липолиза на среде выявлена высокая корреляция. Прозрачная зона обусловлена лецитиназой стафилококков, которая расщепляет яичный желток. Почти 100 % коагулазоположительных стафилококков способны восстанавливать теллурит, в результате чего образуются чёрные колонии; другие стафилококки не всегда обладают такой способностью.

Среда менее ингибирующая для Staphylococcus aureus, чем другие среды, и одновременно обладает большей селективностью. Агар Бэрда—Паркера был принят AOAC International в качестве официальной среды и рекомендован Фармакопеей США (USP) для микробиологических испытаний на микробную обсеменённость. Комитет ISO также рекомендовал среду для выделения и количественного определения стафилококков.

Добавление плазмы фибриногена позволяет выявлять коагулазную активность. Ингибитор трипсина в плазме фибриногена FD195 растворяют в 10 мл стерильной дистиллированной воды, после чего добавляют к 90 мл расплавленной стерильной среды, охлаждённой до 45–50 °C. На такой среде через 24–48 ч инкубации при 35 °C коагулазоположительные колонии имеют окраску от белой до серо-чёрной и окружены непрозрачной зоной, обусловленной коагулазной активностью.

При использовании плазмы фибриногена эмульсия яичного желтка отсутствует, поэтому восстановление теллурита является необходимым. В результате агар становится полупрозрачным, а колонии стафилококков приобретают окраску от белой до серой.

Добавление 50 мг/л сульфаметазина подавляет рост и роение видов Proteus.

Триптон, пептон HM B и дрожжевой экстракт служат источниками азота, углерода, серы и витаминов. Пируват натрия защищает повреждённые клетки, способствует их восстановлению и стимулирует рост Staphylococcus aureus, не снижая селективность среды. Хлорид лития и теллурит калия подавляют большинство сопутствующей микрофлоры, за исключением Staphylococcus aureus.

Добавка теллурита токсична для штаммов, отличных от S. aureus, которые способны расщеплять яичный желток, и придаёт колониям чёрную окраску.

Глицин и пируват усиливают рост Staphylococcus. После добавления яичного желтка среда становится жёлтой и непрозрачной. Добавка яичного желтка не только обогащает среду, но и помогает идентификации, демонстрируя лецитиназную активность — реакцию с яичным желтком. Прозрачная зона и серо-чёрные колонии являются диагностическими признаками коагулазоположительных стафилококков. При дальнейшем инкубировании вокруг колоний формируется непрозрачная зона, которая может быть обусловлена липолитической активностью.

Базовая среда без яичного желтка и теллурита сохраняет стабильность.

Методика посева и инкубации

1. Инокулируйте исследуемый материал в объёме 0,1 мл на одну чашку Петри диаметром 90–100 мм.
2. Инкубируйте при 37 °C.
3. Проведите первое считывание через 24–26 ч.
4. Колонии Staphylococcus aureus имеют чёрную блестящую окраску, тонкий белый край и окружены прозрачной зоной.
5. Продолжите инкубацию при 37 °C ещё 24 ч.
6. Выполните коагулазный тест для колоний с указанными характеристиками, сформировавшихся в течение дополнительного периода инкубации.

Тип образца

• Пищевые образцы
• Молочные образцы

Сбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Кремовый или жёлтый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 2,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• После добавления эмульсии яичного желтка с теллуритом FD046: в чашках Петри образуется жёлтый непрозрачный гель.

Реакция

• Условия определения: реакция 6,