Сухая питательная среда Агар Бэрда-Паркера с сульфаметазином HiMedia M1140-500G для изоляции и количественного учёта коагулаза-положительных стафилококков из пищевых продуктов и других материалов. Среда обеспечивает дифференциацию штаммов за счёт определения лецитиназной активности и способности восстанавливать теллурит.

Принцип измерения и интерпретация

Агар Бэрда-Паркера разработан для выделения стафилококков, позволяя эффективно дифференцировать коагулаза-положительные штаммы. Высокая корреляция между тестом на коагулазу и наличием зоны липолиза (очищения) в данной среде обусловлена действием лецитиназы стафилококков, которая расщепляет яичный желток. Почти 100 % коагулаза-положительных стафилококков способны восстанавливать теллурит, что приводит к образованию чёрных колоний.

Роль компонентов:

• Триптон, пептон HM B и экстракт дрожжей: источники азота, углерода, серы и витаминов.
• Пируват натрия: защищает повреждённые клетки, способствует их восстановлению и стимулирует рост Staphylococcus aureus без потери селективности.
• Хлорид лития и теллурит калия: ингибируют большинство contaminating-микрофлоры, кроме S. aureus. Теллурит токсичен для штаммов, очищающих желток (кроме S. aureus), и придает колониям чёрный цвет.
• Глицин и пируват: усиливают рост стафилококков.
• Яичный желток: служит источником обогащения и позволяет идентифицировать лецитиназную активность (реакция с яичным желтком).
• Сульфаметазин: подавляет рост и «роение» (swarming) видов Proteus.

Интерпретация результатов:

• Коагулаза-положительные стафилококки: характеризуются образованием серо-чёрных колоний с прозрачной зоной вокруг них. При дальнейшей инкубации вокруг колоний может развиться опалесцирующая зона вследствие липолитической активности.
• S. aureus: чёрные блестящие колонии с тонким белым ободком, окружённые зоной очищения.
• Подтверждение: идентичность выделенного S. aureus должна быть подтверждена тестом на коагулазу.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 63,05 г порошка в 950 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx 0,1$ МПа / 15 lbs) в течение 15 минут.
4. Охладите до 50 °C.
5. Асептически добавьте один из вариантов добавок:
   • 50 мл концентрированной эмульсии яичного желтка (FD045) и 3 мл стерильного 3,5 % раствора теллурита калия (FD047);
   • либо 50 мл эмульсии яичного желтка с теллуритом (FD046).
6. Тщательно перемешайте и разлейте по стерильным чашкам Петри.

Процедура анализа

1. Внесите исследуемый материал (0,1 мл на чашку диаметром 90–100 мм).
2. Инкубируйте при 37 °C.
3. Проведите первый считывание результатов через 24–26 часов.
4. Для дальнейшего анализа инкубируйте при 37 °C ещё 24 часа.
5. Выберите 20–200 колоний, имеющих характеристики S. aureus (чёрные, блестящие, с белым ободком и зоной очищения), и проведите тест на коагулазу.
6. Результат выражается в количестве S. aureus на грамм продукта.

Определение коагулазной активности (альтернативный метод)

Для прямого обнаружения коагулазной активности в среду добавляют добавку «Ингибитор трипсина плазмы фибриногена» (FD195):

• Растворите добавку в 10 мл стерильной дистиллированной воды.
• Добавьте раствор к 90 мл стерильной расплавленной среды (температура 45–50 °C).
• Коагулаза-положительные колонии через 24–48 часов инкубации при 35 °C выглядят от белых до серо-чёрных и окружены непрозрачной зоной.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,0 $\pm$ 0,2.

• Эквивалент мясного экстракта.

Дополнительные параметры

Контроль качества

Внешний вид и свойства

• Вид порошка: однородный свободнотекущий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 2,0 % агаром.
• Цвет и прозрачность:
  • Базовая среда: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
  • После добавления эмульсии яичного желтка с теллуритом (FD046): жёлтый непрозрачный гель.
• Реакция: pH 6,80–7,20 (водный раствор 6,3 % масс/об при 25 °C).

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при использовании эмульсии яичного желтка с теллуритом (FD046) после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 часов.

Область применения и ограничения

Типы образцов: пищевые продукты и молочные пробы.

Ограничения:

1. Чашки следует использовать в день приготовления или в течение 48 часов, чтобы избежать потери чёткости зон осаждения.
2. Некоторые contaminating-организмы могут расщеплять гало коагулазной реакции.
3. Другие бактерии могут расти на данной среде, однако биохимические тесты позволяют дифференцировать коагулаза-положительные стафилококки.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать крышку для предотвращения комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Утилизация: загрязнённые материалы должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией в соответствии с лабораторными протоколами работы с инфекционными материалами.

Меры предосторожности

• Использовать защитные перчатки, спецодежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдать надлежащую микробиологическую лабораторную практику.
• Перед открытием контейнера ознакомиться с этикеткой.