HiMedia M1139I-500G Селективная основа агара для Bacillus cereus (MYP)

Селективная питательная среда HiMedia M1139I-500G Селективная основа агара для Bacillus cereus (MYP) — порошковая основа с конечным pH 7,2 ± 0,2. Среда предназначена для выделения и идентификации видов Bacillus и патогенных стафилококков, а селективность обеспечивается добавлением 50 000 ед. полимиксина B и 100 мл эмульсии яичного желтка на 1 л среды.

Назначение и область применения

Среда рекомендована для выделения и идентификации видов Bacillus и патогенных стафилококков.

Тип образца: пищевые продукты и корма для животных.

Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 7932:2004/Amd 1:2020 и ISO 11133:2014 (E) & Amd:2020. ISO 7932:2004/Amd 1:2020 устанавливает метод количественного определения предположительно присутствующего Bacillus cereus методом подсчёта колоний при 30 °C.

Состав среды

Спецификация ISO: MYP

Состав на 1 л:

Полимиксин B сульфат: 50 000 ед.

Эмульсия яичного желтка: 100,00 мл.

Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Селективная основа агара для Bacillus cereus (MYP) по ISO 7932

Состав на 1 л:

Селективная добавка PolyB (FD003): 2 флакона.

Состав селективной добавки PolyB: полимиксин B сульфат, 50 000 ед.

Эмульсия яичного желтка FD045: 100 мл.

Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Мясной экстракт эквивалентен экстракту говядины.

Принцип действия и интерпретация

Bacillus cereus широко распространён в почве, растительности, воде и пыли. Микроорганизм выделяли из различных пищевых продуктов, пастеризованного свежего и сухого молока, а также переработанных пищевых продуктов. При благоприятных условиях Bacillus cereus размножается и вызывает желудочно-кишечные заболевания.

Bacillus cereus связан с двумя формами пищевого отравления:

• рвотная форма обусловлена высокостабильным токсином, устойчивым к высокой температуре, воздействию трипсина, пепсина и экстремальным значениям pH;
• диарейная форма обусловлена термо- и кислотолабильным энтеротоксином.

Ключевой реакцией дифференциальной идентификации Bacillus cereus — наиболее часто встречающегося и значимого вида в клинических лабораториях — от большинства других видов Bacillus является лецитиназная активность. При наличии лецитиназной активности предположительную идентификацию Bacillus cereus проводят с учётом морфологии колоний, гемолитической реакции и результатов тестов на подвижность.

При высокой концентрации в некоторых пищевых продуктах Bacillus cereus образует метаболиты, вызывающие клинические симптомы пищевого отравления.

Среда дифференцирует Bacillus cereus от других бактерий по трём признакам:

• лецитиназная активность;
• ферментация маннита;
• устойчивость к полимиксину, содержащемуся в селективной добавке FD003.

Селективная основа агара для Bacillus cereus рекомендована комитетом ISO для количественного определения Bacillus cereus. Триптон и пептон HM B служат источниками азота. Ферментация маннита выявляется по феноловому красному: в результате образования кислоты колонии, ферментирующие маннит, окрашиваются в жёлтый цвет. Добавленная эмульсия яичного желтка обеспечивает дифференциацию лецитиназа-продуцирующих колоний, вокруг которых формируется зона белого осадка.

Сульфат полимиксина B в составе FD003 ограничивает рост грамотрицательных бактерий, включая Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa.

Дифференциальные свойства среды позволяют отличать Bacillus cereus от других видов Bacillus по неспособности ферментировать маннит и слабому спорообразованию. Bacillus cereus расщепляет компоненты яичного желтка и формирует типичные колонии в виде бацилл с красноватыми зонами и белыми ореолами.

Кислота, образуемая микроорганизмами, отличными от Bacillus cereus, может диффундировать в среду, затрудняя различение ферментирующих и неферментирующих маннит микроорганизмов. Для визуализации истинной реакции рекомендуется переносить подозрительные колонии на свежую среду.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 46,03 г порошка в 900 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин и давлении около 0,103 МПа (15 psi).
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое 2 флаконов стерильного раствора селективной добавки PolyB FD003.
6. Добавьте 100 мл стерильной эмульсии яичного желтка FD045.
7. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Подготовка и обработка образцов

ISO 7932:2004

Подготовьте исследуемый образец в соответствии с конкретным международным стандартом, применимым к соответствующему продукту.

Как можно быстрее осторожно распределите посевной материал по поверхности агара, не касаясь шпателем боковых стенок чашки. Подготовленные чашки переверните и инкубируйте в термостате при 30 °C в течение 18–24 ч.

Если колонии не видны чётко, инкубируйте чашки дополнительно 24 ч перед подсчётом.

Предположительно положительные колонии крупные, розовые, что указывает на отсутствие ферментации маннита; как правило, колонии окружены зоной осадка, указывающей на образование лецитиназы.

Подтверждение

Пересевают отобранные колонии штриховым посевом, уколом или точечным посевом на поверхность кровяного агара с овечьей кровью. Посев выполняют так, чтобы обеспечить корректную интерпретацию реакции гемолиза.

Инкубируйте при 30 °C в течение 24 ч ± 2 ч, затем интерпретируйте реакцию гемолиза.

Технические характеристики