Основа колумбийского кровяного агара с гемином HiMedia M1133-500G (уп/500 гр)

Питательная среда «Основа колумбийского кровяного агара с гемином HiMedia M1133-500G (уп/500 гр)» представляет собой обогащённую порошковую основу для приготовления кровяного, шоколадного, селективного и идентификационного агара. Основа применяется для культивирования аэробных микроорганизмов в клинических образцах, содержит гемин и имеет конечный pH 7,3 ± 0,2 при 25 °C.

Назначение

Обогащённая основа предназначена для приготовления:

• шоколадного агара;
• кровяного агара;
• различных селективных сред;
• идентификационных сред.

Тип образца: клинические образцы, содержащие аэробные микроорганизмы.

Состав

Состав на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Методика приготовления

1. Суспендировать 44,01 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизовать автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладить стерильную основу до 45–50 °C перед добавлением термочувствительных компонентов.

Приготовление кровяного агара

Добавить 5 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы к стерильной охлаждённой основе.

Приготовление шоколадного агара

Добавить 10 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы к стерильной охлаждённой основе. Нагревать до 80 °C в течение 10 мин при постоянном перемешивании.

Приготовление селективных сред

Селективность среды обеспечивается добавлением различных противомикробных препаратов к стерильной основе.

Для Brucella: добавить восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки NPBCVN (FD005) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Для Campylobacter: добавить к 500 мл стерильной расплавленной основы восстановленное содержимое 1 флакона одной из следующих селективных добавок:

• Blaser-Wang (FD006);
• Butzler (FD007);
• Skirrow (FD008);
• VTCA (FD090);
• Butzler VI (FD106).

Одновременно добавить восстановленное содержимое 1 флакона минеральной ростовой добавки Minerals Growth Supplement (FD009).

Для Gardnerella: добавить восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки GNA (FD056) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Для кокков: добавить восстановленное содержимое 1 флакона одной из следующих селективных добавок к 500 мл стерильной расплавленной основы:

• NC (FD030);
• NNP (FD031);
• CO (FD119).

Принцип действия и интерпретация результатов

Columbia Agar Base используется как основа для сред с кровью и селективных составов, содержащих различные комбинации противомикробных добавок.

Кровь овцы обеспечивает выявление гемолитических реакций и поставляет фактор X — гемин, необходимый для роста многих видов бактерий. При этом кровь овцы не содержит фактор V — никотинамидадениндинуклеотид, поскольку содержит НАД-азу, разрушающую НАД. Поэтому Haemophilus influenzae, которому необходимы оба фактора — X и V, — на этой среде не растёт.

Fildes установил, что питательный агар с добавлением переваренной крови овцы содержит оба фактора и поддерживает рост H. influenzae. Включение бацитрацина делает обогащённую среду Columbia селективной для выделения видов Haemophilus из клинических образцов, особенно из образцов верхних дыхательных путей.

Columbia Blood Agar Base с 1 % агара используется как основа для приготовления сред с кровью и селективных сред, в которых в качестве добавок применяются различные комбинации противомикробных препаратов. Columbia Agar Base с добавлением крови овцы, кролика или лошади получает ростостимулирующие свойства благодаря комбинации пептонов, приготовленных из триптона, пептона и HM-пептона B.

Кукурузный крахмал служит источником энергии и нейтрализует токсичные метаболиты. Кровь овцы позволяет выявлять гемолиз и дополнительно поставляет гем — фактор X, необходимый для роста многих бактерий. Гемин стимулирует рост различных требовательных микроорганизмов.

Из-за относительно высокого содержания углеводов бета-гемолитические стрептококки могут давать зеленоватую гемолитическую реакцию, которую можно ошибочно принять за альфа-гемолиз. Для всех предположительно положительных колоний необходимо выполнять подтверждающие тесты.

Columbia Agar Base с добавлением стерильной сыворотки обеспечивает эффективную среду для определения вирулентности Corynebacterium diphtheriae. При использовании установленной методики для C. diphtheriae линии преципитации токсин–антитоксин отчётливо видны через 48 ч.

Многие патогены требуют диоксида углерода, поэтому чашки можно инкубировать в атмосфере, содержащей приблизительно 3–10 % CO₂.

Условия культивирования

• Культуры Brucella высокоинфекционны и требуют осторожного обращения.
• Культуры Brucella следует инкубировать в атмосфере с 5–10 % CO₂.
• Виды Campylobacter лучше всего выращивать при 42 °C в микроаэрофильной атмосфере.
• Чашки со средой, содержащей добавки для Gardnerella, следует инкубировать при 35 °C в течение 48 ч в атмосфере с 7 % CO₂.

Обращение с образцами

Для клинических образцов необходимо применять соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Приготовленные чашки с дополнительными компонентами следует использовать в течение 18 ч после приготовления для сохранения максимальной селективности.
2. Для подтверждения результатов необходимо дополнительно выполнять биохимические и серологические тесты.
3. Все колонии с предположительными признаками гемолиза требуют подтверждающего исследования, поскольку зеленоватая реакция бета-гемолитических стрептококков может быть ошибочно интерпретирована как альфа-гемолиз.
4. Haemophilus influenzae не растёт на среде без фактора V, поскольку кровь овцы содержит НАД-азу, разрушающую никотинамидадениндинуклеотид.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с гелем 1,5 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Основная среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• После выдерживания расплавленная среда становится мутной.
• После добавления 5 % м/об. стерильной дефибринированной крови в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция

Реакция 4,4 % м/об. водного раствора при 25 °C.

pH: 7,3 ± 0,2.

Диапазон pH

7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяли после добавления 5 % м/об. стерильной дефибринированной крови и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Технические характеристики

• Назначение изделия: основа.
• Производитель: HiMedia.
• Сертификат: ФСЗ 2009/03707.
• Масса упаковки: 500 г.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрывать и хранить продукт в сухом виде.
• Продукт гигроскопичен; при поглощении влаги возможно образование комков.
• Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования контейнер необходимо плотно закрывать.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение установленного срока годности и соблюдении рекомендованных условий хранения.

Требования безопасности

• Только для диагностики in vitro.
• Только