HiMedia M112I-100G Основа мочевинного агара, Кристенсен

Питательная среда HiMedia M112I-100G «Основа мочевинного агара, Кристенсен» — сухая порошкообразная основа для выявления уреазной активности, особенно у представителей рода Proteus. Применяется при анализе проб пищевых продуктов и воды; длительная инкубация может вызвать щелочную реакцию среды и ложноположительный результат.

Назначение

Среда предназначена для выявления продукции уреазы, особенно представителями рода Proteus. Состав и критерии эффективности соответствуют ISO 6579-1:2017.

Состав

Состав приведён в соответствии с ISO 6579-1:2017.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 24,01 г основы в 950 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм (≈0,10 МПа; 121 °C) в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 50 мл стерильной добавки U40 — по 5 мл на флакон (FD048).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные пробирки.
8. Дайте среде застыть в наклонном положении, сформировав скошенную поверхность.

Не перегревайте и не подвергайте среду повторному нагреву, поскольку мочевина легко разлагается.

Принцип действия и интерпретация

Мочевинный агар описан Кристенсеном для выявления уреазной активности у быстро уреазоположительных представителей Proteus, а также у других представителей семейства Enterobacteriaceae, которые дают замедленную уреазную реакцию.

Выявление реакции обеспечивается следующими особенностями состава:

• добавлением глюкозы в питательную среду;
• снижением концентрации пептона;
• уменьшением буферной ёмкости среды, что позволяет выявлять даже небольшое количество образующейся щёлочи.

Для выявления быстрой уреазной активности комитет ISO рекомендовал основу мочевинного агара Кристенсена M112I с одним фосфатом вместо двух фосфатов.

На поверхность скошенной части среды вносят обильный посев исследуемой культуры. При инкубации мочевина расщепляется с образованием аммиака. Аммиак подщелачивает среду, что вызывает изменение окраски индикатора фенолового красного от оранжевой до розовой или розово-красной. Продолжительная инкубация может привести к появлению щелочной реакции в среде независимо от специфичной уреазной активности, поэтому для отрицательного контроля используют среду без мочевины.

Функции компонентов:

• пептон служит источником азота и углерода, аминокислот с длинной цепью, витаминов и других необходимых питательных веществ;
• декстроза является источником энергии;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды;
• фосфаты выполняют буферную функцию;
• мочевина гидролизуется с высвобождением аммиака;
• феноловый красный выявляет образующуюся щёлочность по видимому изменению окраски от оранжевой до розовой.

Тип образца

• Пищевые продукты.
• Вода.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и подготовки проб согласно установленным руководствам.

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и подготовки проб в соответствии с руководствами и действующими местными стандартами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения и мешающие факторы

• Продолжительная инкубация может вызвать щелочную реакцию среды.
• Все среды для определения уреазы основаны на выявлении образования щёлочи и поэтому не позволяют специфично определить абсолютную скорость уреазной активности.
• Утилизация белков может повысить pH до щелочных значений вследствие гидролиза белков.
• Избыточное высвобождение аминокислот может привести к ложноположительной реакции.

Контроль качества

Внешний вид: однородный, легко сыпучий порошок от светло-жёлтого до светло-розового цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в пробирках в виде скошенной поверхности образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель желтовато-оранжевого цвета.

Реакция: реакция 2,4%-ного массо-объёмного водного раствора при 25 °C; pH 6,8 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики

Характеристики определяют после добавления 40%-ной добавки U40 — 5 мл на флакон (FD048) — и инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Proteus hauseri ранее обозначался как Proteus vulgaris.

Klebsiella aerogenes ранее обозначался как Enterobacter aerogenes.

Технические характеристики

• Наименование: основа мочевинного агара, Кристенсен
• Артикул: M112I-100G
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Физическая форма: порошок
• Происхождение сырья: животное
• Тип продукта: стандартный
• Масса: 100 г
• Материал упаковки: ПНД (полиэтилен высокой плотности)
• Температура хранения сухой основы: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,60–7,00

Условия хранения и срок годности

Храните сухую основу при температуре 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости.

Приготовленную среду храните при температуре 2–8 °C. Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрыв флакон, чтобы предотвратить образование комков вследствие гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к комкованию.

Храните продукт в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывайте ёмкость. Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение установленного срока годности.

Меры безопасности

Перед открытием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.

При работе используйте:

• защитные перчатки;
• защитную одежду;
• средства защиты глаз;
• средства защиты лица.

При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики и стандартные меры предосторожности согласно действующим руководствам. Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцом, необходимо обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими методами лабораторной работы.

Отличие методики

В основе мочевинного агара Кристенсена M112I используется одна фосфатная система вместо двух фосфатов; снижение буферной ёмкости повышает чувствительность выявления небольших количеств щёлочи, образующейся при гидролизе мочевины.