Основа М-агара РА для технологии мембранных фильтров HiMedia M1121-500G (уп/500 гр)

Основа питательной среды «Основа М-агара РА для технологии мембранных фильтров HiMedia M1121-500G (уп/500 гр)» предназначена для мембранного определения и выделения Pseudomonas aeruginosa. Применяется для анализа хлорированной питьевой воды, воды бассейнов, термальных источников и солёной воды; готовая среда используется с селективной добавкой M-PA Selective Supplement (FD202) и инкубацией при 41,5 ± 0,5 °C.

Назначение

Среда предназначена для обнаружения и выделения Pseudomonas aeruginosa методом мембранной фильтрации.

• Тип питательной среды: диагностическая
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Форма выпуска: порошок
• Масса упаковки: 500 г
• Регистрационное обозначение: ФСЗ 2009/03709
• Производитель: HiMedia
• Тип упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности)
• Происхождение: животное

Состав

Состав на 1 л очищенной или дистиллированной воды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

• Конечный pH при 25 °C: 7,1 ± 0,2

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 39,68 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки M-PA Selective Supplement (FD202).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри или используйте другим предусмотренным способом.

Принцип действия и интерпретация

Метод наиболее вероятного числа (MPN) обеспечивает удовлетворительное выделение Pseudomonas aeruginosa, однако не предназначен для анализа проб воды большого объёма и характеризуется недостаточной точностью при выделении Pseudomonas aeruginosa.

Агар M-PA разработан Levin и Cabelli как селективная мембранная фильтрующая среда для Pseudomonas aeruginosa. Многие среды для выделения P. aeruginosa обладают недостаточной специфичностью и имеют ограниченную ценность при наличии в пробах воды большого количества разнообразной микрофлоры. Исходная среда была модифицирована за счёт повышения pH и изменения состава или концентрации компонентов.

Среда включена в раздел 914 C «Метод мембранной фильтрации для P. aeruginosa» (предварительный вариант) стандартизованных методов исследования воды и сточных вод.

• Дрожжевой экстракт, лизин и углеводы обеспечивают соединения азота, источники энергии и витамины, необходимые для бактериального метаболизма.
• Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.
• Неорганические соли обеспечивают необходимые ионы.
• Канамицин ингибирует синтез белка у грамположительных организмов.
• Циклогексимид, входящий в состав добавки FD202, подавляет грибковую флору.
• Налидиксовая кислота блокирует репликацию чувствительных грамотрицательных бактерий.
• Феноловый красный является индикатором pH и приобретает жёлтую окраску в кислых условиях вследствие ферментации углеводов.

Типы исследуемых образцов

Допустимые образцы:

• хлорированная питьевая вода;
• вода бассейнов;
• вода термальных источников;
• солёная вода.

Отбор проб и проведение анализа

1. Профильтруйте пробу воды через стерильный мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм и нанесённой координатной сеткой.
2. Поместите мембранный фильтр на поверхность чашки с агаром M-PA, не допуская образования пузырьков между агаром и поверхностью фильтра.
3. Инкубируйте в аэробной атмосфере в течение 24 ч при 41,5 ± 0,5 °C.
4. Оптимальная плотность колоний на мембранном фильтре составляет 20–200 колоний.
5. Если плотность составляет 2 или менее колоний на квадрат, подсчитайте все колонии на фильтре.
6. При наличии 3–10 колоний на квадрат определите среднее значение по 10 квадратам.
7. При наличии 10–20 колоний на квадрат определите среднее значение по 5 квадратам.
8. Для расчёта количества колоний на 1 мл умножьте среднее количество колоний на квадрат на 100 и на обратную величину разведения.
9. После использования загрязнённые материалы перед утилизацией необходимо стерилизовать автоклавированием.

Контроль качества

Внешний вид

• Внешний вид: однородный, сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета

Гелеобразование

• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Цвет и прозрачность: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель оранжево-красного цвета

Реакция

• Реакция: реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 3,97 % при 25 °C
• pH: 7,1 ± 0,2

Диапазон pH

• pH: 6,90–7,30

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 41,5 ± 0,5 °C в течение не более 72 ч с добавлением селективной добавки M-PA Selective Supplement (FD202).

* Соответствующие номера WDCM.

Ограничения применения

1. Отдельные организмы имеют различные требования к росту и могут демонстрировать неодинаковый характер роста на среде.
2. Каждая серия среды протестирована на организмы, указанные в сертификате анализа (COA). Для любого конкретного микроорганизма, не указанного в COA, рекомендуется валидировать среду в соответствии с требованиями пользователя.
3. Для подтверждения результатов необходимы дополнительные биохимические и серологические тесты.

Оценка рабочих характеристик

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованных температурных условиях.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Условия хранения сухой среды: в плотно закрытой ёмкости
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить в сухом виде для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности продукта.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Место хранения: сухое, хорошо проветриваемое, защищённое от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования ёмкость необходимо плотно закрывать.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение установленного срока годности.

Меры предосторожности

• Перед вскрытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с утверждёнными руководствами.
• Для получения дополнительных указаний по безопасности обращайтесь к соответствующим паспортам безопасности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов необходимо соблюдать утверждённые лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцом, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Комплект поставки и дополнительные компоненты

По заявке поставляется:

• FD057 — 1%-ный раствор трифенилтетразолия хлорида, 5 флаконов по 10 мл.

Для приготовления среды по методике производителя требуется селективная добавка M-PA Selective Supplement (FD202), восстановленное содержимое 1 флакона добавляют после охлаждения основы до 45–50 °C.

Техническая документация и методические основы

Модификации среды M-PA связаны с повышением pH и изменением состава или концентрации компонентов для повышения пригодности к мембранной фильтрации при выделении Pseudomonas aeruginosa. Методика относится к мембранному фильтрующему методу, описан