Агар Эндо LES для мембранной технологии HiMedia M1106-500G (уп/500 гр)

Диагностическая питательная среда Агар Эндо LES для мембранной технологии HiMedia M1106-500G (производство: HiMedia) предназначена для подсчета колиформных бактерий в воде. Применяется в двухэтапном мембранном методе фильтрации; состав соответствует рекомендациям APHA для анализа питьевой и бутилированной воды.

Принцип измерения

Метод основан на использовании мембранных фильтров с малым размером пор, которые задерживают бактерии на поверхности. При контакте с питательной средой микроорганизмы растут в виде поверхностных колоний.

Среда Эндо была разработана для дифференциации бактерий, ферментирующих лактозу, от неферментирующих. В данной модификации (LES — Lawrence Experimental Station) вместо желчных солей используются сульфит натрия и основной фуксин для подавления роста грамположительных бактерий. Колиформы ферментируют лактозу, и образующийся ацетальдегид реагирует с сульфитом натрия и основным фуксином, что приводит к формированию красных колоний и соответствующему окрашиванию среды. Бактерии, не ферментирующие лактозу, образуют бесцветные колонии.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 51,05 г порошка в 980 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов. НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ.
3. Охладите до 45–50 °C и асептически добавьте 20 мл 95 % этанола.
4. Перемешайте и разлейте по 4 мл в чашки Петри диаметром 60 мм. Для больших чашек используйте объем, обеспечивающий толщину слоя 1,5 мм.
5. НЕ ДОПУСКАТЬ воздействия прямых солнечных лучей на готовые чашки.

Процедура анализа (двухэтапный метод)

Этап 1: Обогащение

• Вариант А: Ватный абсорбирующий тампон пропитывают бульоном с лауриловым сульфатом (M080). Мембранный фильтр, через который пропустили пробу воды, асептически помещают на тампон и инкубируют (без переворачивания) в течение 2 часов при 35 °C в увлажненной атмосфере. После этого фильтр переносят на чашку с агаром M-Endo LES.
• Вариант Б: Мембранный фильтр помещают под крышку чашки Петри с агаром M-Endo LES, пропитывают 2 мл бульона с лауриловым сульфатом (M080) и инкубируют 1–12 часов при 35 °C.

Этап 2: Посев и инкубация Подготовленный мембранный фильтр помещают непосредственно на поверхность агара и инкубируют при 35 °C в течение 24 часов.

Интерпретация результатов и расчет

Предположительные колиформы образуют розовые или красные колонии с металлическим блеском (золотисто-зеленым) через 24 часа инкубации при 35–37 °C.

Расчет плотности колиформ: Результат выражается в количестве общих колиформ на 100 мл. Для экстраполяции используют фильтры, содержащие от 20 до 80 колоний колиформ (но не более 200 колоний всех типов на одну мембрану).

Формула расчета: $\text{Общее число колоний колиформ/100 мл} = \frac{\text{количество колоний колиформ}}{\text{мл отфильтрованной пробы}} \times 100$

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,2 ± 0,2

Общие параметры

• Сертификат: ФСЗ 2009/03709
• Внешний вид: однородный свободнотекучий порошок от светло-розового до пурпурного цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: красный, слегка опалесцирующий гель.
• Диапазон pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 20–24 часов.

* Соответствующие номера WDCM. Примечание: Klebsiella aerogenes ранее именовалась как Enterobacter aerogenes.

Область применения и ограничения

• Тип образцов: пробы воды.
• Ограничения: из-за различий в трофических потребностях некоторые штаммы могут расти плохо. При слишком высокой плотности посева (инкулята) металлический блеск колоний может быть подавлен.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C. Готовую среду хранить при 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать для предотвращения образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников воспламенения и экстремальных температур.

Утилизация

Загрязненные материалы и использованные среды подлежат обязательной стерилизации в автоклаве или сжиганию в соответствии с установленными лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.