Агар Эндо LES для мембранной технологии HiMedia M1106-500G (уп/500 гр)

Питательная среда Агар Эндо LES для мембранной технологии HiMedia M1106-500G (уп/500 гр) предназначена для выявления колиформных бактерий в воде и имеет конечный pH 7,2 ± 0,2. Агар Эндо LES применяют для количественного определения колиформных бактерий двухэтапным методом мембранной фильтрации, при этом слишком высокая посевная доза может подавлять металлический блеск колоний.

Назначение

Среда рекомендована для количественного определения колиформных бактерий в пробах воды с использованием двухэтапной мембранной фильтрации.

Состав

Состав на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Модель/артикул: M1106-500G
• Полное наименование: Агар Эндо LES для мембранной технологии
• Тип питательной среды: диагностический
• Назначение изделия: агар
• Происхождение: животное
• Тип продукта: стандартный
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности)
• Сертификат: ФСЗ 2009/03709
• Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 51,05 г порошка в 980 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Не стерилизуйте автоклавированием.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 20 мл 95%-ного этанола.
6. Перемешайте и разлейте порциями по 4 мл в чашки Петри диаметром 60 мм.
7. При использовании больших чашек внесите достаточное количество среды для формирования слоя толщиной 1,5 мм.
8. Не подвергайте чашки воздействию прямого солнечного света.

Принцип действия и интерпретация результатов

Бактерии могут быть удалены из жидкостей пропусканием жидкости через фильтры с настолько малым размером пор, что бактерии задерживаются на поверхности фильтра. Мембранная фильтрация позволяет быстро пропускать под давлением относительно большие объёмы воды, предотвращая прохождение содержащихся в пробе бактерий.

Питательные вещества удерживаются на поверхности мембраны. После этого мембрану приводят в контакт с подходящей жидкой питательной средой; питательные вещества диффундируют вверх через поры мембраны и обеспечивают рост микроорганизмов в виде поверхностных колоний, которые можно подсчитать.

Среда Эндо первоначально была разработана для дифференциации бактерий, ферментирующих лактозу, и бактерий, не ферментирующих лактозу. В исходной среде сульфит натрия и основной фуксин использовались вместо желчных солей для ингибирования грамположительных бактерий.

M-Endo Agar LES является модификацией исходной среды, разработанной по формуле McCarthy и соавторов для Lawrence Experimental Station (LES). Среда предназначена для исследования колиформных бактерий в воде двухэтапным методом мембранной фильтрации, в котором бульон лаурилсульфата (M080) используют в качестве первичной обогатительной среды. Метод рекомендован APHA для анализа питьевой и бутилированной воды.

Предположительно колиформные бактерии образуют красные колонии с металлическим блеском после инкубации при 35–37 °C в течение 24 ч. В описанной двухэтапной процедуре предположительно колиформные бактерии образуют золотисто-зелёные колонии с металлическим блеском в течение 24 ч инкубации.

Триптон, триптоза, пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают колиформные бактерии необходимыми питательными веществами, особенно азотистыми. Лактоза является сбраживаемым углеводом. Сульфит натрия, дезоксихолат натрия и основной фуксин ингибируют рост грамположительных микроорганизмов. Фосфаты выполняют буферную функцию.

Колиформные бактерии сбраживают лактозу. Образующийся ацетальдегид реагирует с сульфитом натрия и основным фуксином с образованием красных колоний и аналогичного окрашивания среды. Бактерии, не ферментирующие лактозу, образуют бесцветные колонии.

Двухэтапная мембранная фильтрация

Первый вариант процедуры

1. Пропитайте ватную абсорбирующую подложку бульоном лаурилсульфата (M080).
2. Пропустите пробу воды через мембранный фильтр.
3. В асептических условиях поместите мембранный фильтр на пропитанную подложку.
4. Инкубируйте мембранный фильтр без переворачивания в течение 2 ч при 35 °C во влажной атмосфере.
5. После инкубации в асептических условиях перенесите мембранный фильтр на чашку с агаром Эндо LES.
6. Инкубируйте чашку при 35 °C в течение 24 ч.
7. На втором этапе поместите подготовленный мембранный фильтр непосредственно на поверхность агара и инкубируйте в указанном режиме.

Альтернативный вариант процедуры

1. Поместите мембранный фильтр с подложкой внутрь крышки чашки Петри с агаром Эндо LES.
2. Пропитайте подложку 2 мл бульона лаурилсульфата (M080).
3. Инкубируйте в течение 1–12 ч при 35 °C.
4. На втором этапе поместите подготовленный мембранный фильтр непосредственно на поверхность агара.
5. Инкубируйте при 35 °C в течение 24 ч.

Расчёт плотности колиформных бактерий

Плотность колиформных бактерий выражают как общее количество колиформных бактерий на 100 мл пробы.

Для экстраполяции результата используйте мембранные фильтры, на которых выросло 20–80 колоний колиформных бактерий, но общее количество колоний всех типов на одном мембранном фильтре не превышает 200.

Формула расчёта:

Общее количество колиформных бактерий/100 мл = количество колоний колиформных бактерий / объём профильтрованной пробы в мл × 100

Тип образца

Тип образца: пробы воды.

Отбор и обращение с образцами

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов в соответствии с руководствами и местными нормативными документами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный, легко сыпучий порошок от светло-розового до пурпурного цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется красный слегка опалесцирующий гель.

Реакция среды

Реакция: реакция 5,1%-ного водного раствора с 2%-ным объёмным содержанием спирта при 25 °C.

pH: 7,2 ± 0,2.

Диапазон pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 20–24 ч.