Агар Эндо LES для мембранной технологии HiMedia M1106-100G (уп/100 гр)

Питательная диагностическая среда Агар Эндо LES для мембранной технологии HiMedia M1106-100G (уп/100 гр) представляет собой порошковую среду для микробиологического анализа воды. Агар Эндо LES применяют для подсчёта колиформных бактерий двухэтапным методом мембранной фильтрации с последующей инкубацией мембранного фильтра на питательной среде.

Назначение

Среда предназначена для определения количества колиформных бактерий в образцах воды методом двухэтапной мембранной фильтрации. Тип питательной среды: диагностический.

Изделие: агар.

Сертификат: ФСЗ 2009/03709.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности среды.

Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 51,05 г порошка в 980 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Не автоклавируйте.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 20 мл 95%-ного этанола.
6. Перемешайте и разлейте по 4 мл в чашки Петри диаметром 60 мм.
7. При использовании больших чашек внесите достаточное количество среды для формирования слоя толщиной 1,5 мм.
8. Не подвергайте чашки воздействию прямых солнечных лучей.

Принцип действия и интерпретация результатов

Бактерии удаляются из жидкостей пропусканием образца через фильтры с настолько малым размером пор, что микроорганизмы задерживаются на поверхности фильтра. Метод мембранной фильтрации позволяет быстро пропускать под давлением большие объёмы воды и предотвращает прохождение содержащихся в образце бактерий.

Питательные вещества задерживаются на поверхности мембраны. Мембрану приводят в контакт с подходящей жидкой питательной средой; питательные вещества диффундируют вверх через поры мембраны и обеспечивают рост микроорганизмов в виде поверхностных колоний, которые затем подсчитывают.

Среда Эндо первоначально была разработана для дифференциации ферментирующих и неферментирующих лактозу микроорганизмов. В исходной рецептуре для ингибирования грамположительных бактерий вместо желчных солей применялись сульфит натрия и основной фуксин.

M-Endo Agar LES представляет собой модификацию исходной среды, разработанную по формуле McCarthy и соавторов для Lawrence Experimental Station (LES). Среда предназначена для исследования колиформных бактерий в воде двухэтапным методом мембранной фильтрации; на первом этапе в качестве обогащающей среды используют бульон с лаурилсульфатом (M080). Метод применяется для анализа питьевой и бутилированной воды в соответствии с методическими подходами APHA.

Предположительно колиформные бактерии образуют красные колонии с металлическим блеском после инкубации при 35–37 °C в течение 24 ч. В описанной двухэтапной процедуре также указано образование золотисто-зелёных колоний с металлическим блеском в течение 24 ч инкубации.

Триптон, триптоза, пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают микроорганизмы необходимыми питательными веществами, особенно азотистыми соединениями. Лактоза служит сбраживаемым углеводом. Сульфит натрия, дезоксихолат натрия и основной фуксин ингибируют рост грамположительных микроорганизмов. Фосфаты буферируют среду.

Колиформные бактерии сбраживают лактозу. Образующийся ацетальдегид реагирует с сульфитом натрия и основным фуксином с образованием красных колоний и аналогичного окрашивания среды. Неферментирующие лактозу микроорганизмы образуют бесцветные колонии.

Методика двухэтапного анализа

Первый этап — обогащение

1. Пропитайте ватный абсорбирующий диск бульоном с лаурилсульфатом (M080).
2. Пропустите исследуемую пробу воды через мембранный фильтр.
3. В асептических условиях поместите мембранный фильтр на пропитанный диск.
4. Инкубируйте мембранный фильтр без переворачивания в течение 2 ч при 35 °C во влажной атмосфере.
5. После инкубации в асептических условиях перенесите мембранный фильтр на чашку с M-Endo Agar LES.

Альтернативный вариант первого этапа: мембранный фильтр можно поместить внутрь крышки чашки Петри с M-Endo Agar LES, затем пропитать фильтр 2 мл бульона с лаурилсульфатом (M080) и инкубировать в течение 1–12 ч при 35 °C.

Второй этап — культивирование на агаре

1. Поместите подготовленный мембранный фильтр непосредственно на поверхность агара.
2. Инкубируйте при 35 °C в течение 24 ч.
3. Оцените наличие предполагаемых колиформных бактерий по характеру колоний.

Расчёт плотности колиформных бактерий

Плотность колиформных бактерий выражают как общее количество колиформных бактерий на 100 мл образца.

Для экстраполяции результата используют мембранные фильтры, на которых выросло от 20 до 80 колоний колиформных бактерий, но общее количество колоний всех типов на одном фильтре не превышает 200.

Формула расчёта:

Общее количество колиформных колоний/100 мл = количество колиформных колоний / объём профильтрованного образца в мл × 100

Тип образца

Тип образца: вода.

Отбор и обращение с образцами

Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора проб и обработки образцов согласно действующим руководствам и локальным нормативам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры безопасности

• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные действующими руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения метода

• Из-за различий в потребностях микроорганизмов в питательных веществах отдельные штаммы могут расти плохо.
• При чрезмерно высокой посевной дозе металлический блеск колоний может быть подавлен.

Контроль качества

Эффективность среды обеспечивается при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованном температурном диапазоне.

• Внешний вид: однородный, свободно текучий порошок от светло-розового до фиолетового цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: красный слегка опалесцирующий гель, образующийся в чашках Петри.
• Реакция: реакция 5,1%-ного водного раствора с 2% об. спирта при 25 °C.
• pH реакционной смеси: 7,2 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,00–7,40.

Культураль