Агар Эндо LES для мембранной технологии HiMedia M1106-100G (уп/100 гр)

Диагностическая питательная среда Агар Эндо LES для мембранной технологии HiMedia M1106-100G (производство: HiMedia) предназначена для подсчета колиформных бактерий в воде. Применяется в двухэтапном мембранном методе фильтрации; сертификат ФСЗ 2009/03709.

Принцип измерения и интерпретация

Метод основан на фильтрации жидкости через мембрану с малым размером пор, которая задерживает бактерии на поверхности. Последующий контакт мембраны с питательной средой позволяет микроорганизмам расти в виде поверхностных колоний.

Среда M-Endo Agar LES является модификацией оригинальной среды Эндо, разработанной для дифференциации бактерий, ферментирующих лактозу, от неферментирующих. Вместо желчных солей для подавления роста грамположительных бактерий используются сульфит натрия и основной фуксин. Среда сформулирована согласно методике McCarthy et al (Lawrence Experimental Station, LES) для двухэтапного анализа воды, где в качестве первичной среды обогащения используется бульон с лауриловым сульфатом (M080).

Интерпретация результатов:

• Презумптивные колиформы: образуют красные колонии с металлическим блеском после инкубации при 35–37 °C в течение 24 часов.
• Неферментирующие лактозу бактерии: образуют бесцветные колонии.

Роль компонентов:

• Триптон, триптоза, пептон и дрожжевой экстракт: обеспечивают основные азотистые питательные вещества.
• Лактоза: ферментируемый углевод.
• Сульфит натрия, дезоксихолат натрия и основной фуксин: ингибируют рост грамположительных организмов.
• Фосфаты: поддерживают pH среды.
• Механизм окрашивания: при ферментации лактозы образуется ацетальдегид, который реагирует с сульфитом натрия и основным фуксином, что приводит к формированию красных колоний и окрашиванию окружающей среды.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Суспендировать 51,05 г порошка в 980 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов. НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ.
3. Охладить до 45–50 °C и асептически добавить 20 мл 95% этанола.
4. Перемешать и разлить по 4 мл в чашки Петри диаметром 60 мм. Для больших чашек использовать объем, обеспечивающий глубину слоя 1,5 мм.
5. НЕ ДОПУСКАТЬ воздействия прямых солнечных лучей на готовые чашки.

Процедура анализа (двухэтапный метод)

Этап 1: Обогащение

• Ватный абсорбирующий тампон пропитывают бульоном с лауриловым сульфатом (M080).
• Мембранный фильтр, через который пропущена проба воды, асептически помещают на тампон и инкубируют без переворачивания в течение 2 часов при 35 °C во влажной атмосфере.
• Альтернатива: мембранный фильтр помещают под крышку чашки Петри с M-Endo Agar LES, пропитывают 2 мл бульона с лауриловым сульфатом (M080) и инкубируют от 1 до 12 часов при 35 °C.

Этап 2: Посев на агар

• Подготовленный мембранный фильтр асептически переносят непосредственно на поверхность агара M-Endo Agar LES.
• Инкубируют при 35 °C в течение 24 часов.

Расчет плотности колиформ

Результат выражается в количестве общих колиформ на 100 мл пробы. Для экстраполяции используют фильтры, содержащие от 20 до 80 колиформных колоний (но не более 200 колоний всех типов на одну мембрану).

Формула расчета: $\text{Общее число колоний колиформ / 100 мл} = \frac{\text{количество колоний колиформ}}{\text{мл профильтрованной пробы}} \times 100$

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,2 ± 0,2

Общие параметры

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от светло-розового до пурпурного цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5% агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: красный слегка опалесцирующий гель.
• Реакция: pH 7,2 ± 0,2 (для 5,1% водного раствора с 2% содержанием спирта при 25 °C).
• Диапазон pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Характеристики определены после инкубации при 35–37 °C в течение 20–24 часов.

* — соответствующие номера WDCM. Klebsiella aerogenes ранее была известна как Enterobacter aerogenes.

Область применения и ограничения

Тип образцов: пробы воды. Ограничения:

• Из-за различий в трофических потребностях некоторые штаммы могут расти плохо.
• При слишком высокой плотности посева (избыточном инокуляте) металлический блеск колоний может быть подавлен.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать бутылку для предотвращения комкования.
• Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
• Меры предосторожности: использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица). Соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности.
• Утилизация: загрязненные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.