Агар для испытания витамина В12 HiMedia M110-100G (уп/500 гр)

Специальная питательная агаровая среда Агар для испытания витамина В12 HiMedia M110-100G (уп/500 гр) для микробиологического определения витамина B12 методом чашек с использованием мутантной тест-культуры E.coli. Применяется для количественного анализа витамина B12 по зоне роста микроорганизма; для получения корректных результатов необходимо использовать свежеприготовленные чашки.

Назначение и тип среды

Агар HiMedia M110-100G предназначен для микробиологического анализа витамина B12 методом чашек с использованием мутанта E.coli 113-3 Davis ATCC 11105 в качестве тестового организма.

• Тип питательной среды: специальная
• Назначение изделия: агар
• Тип продукта: стандартный
• Происхождение: химически определённая среда HiCynth™
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: стеклянный флакон
• Фасовка: 100 г
• Сертификат: ФСЗ 2009/03707
• Тип образца: изолированные микроорганизмы

Состав и принцип действия

Полная обезвоженная среда для микробиологического анализа витамина B12 содержит все питательные компоненты, необходимые для роста мутанта E.coli 113-3 Davis ATCC 11105, за исключением витамина B12.

Добавление витамина B12 в заданных возрастающих концентрациях вызывает ответную реакцию роста. Интенсивность реакции определяют по диаметру зоны роста вокруг диска или чашки с витамином B12; увеличение диаметра зоны роста пропорционально повышению концентрации витамина B12 в чашке.

Для приготовления стандарта используют стерильные растворы витамина B12 — эталонного стандарта цианокобаламина. При определении содержания витамина B12 в неизвестных материалах анализируемую пробу необходимо правильно разбавить и наносить аналогично разбавлениям стандартных растворов.

Обычно удовлетворительные результаты анализа получают при концентрации витамина B12 от 0 до 300 нг/мл.

Приготовление среды

1. Приготовьте суспензию 51,5 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте для равномерного распределения небольшого количества осадка.
4. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Используйте свежеприготовленную среду.

Перегрев или избыточная стерилизация приводят к неудовлетворительным результатам анализа.

Подготовка инокулята и проб

Инокулят для анализа готовят пересевом из маточной культуры, предварительно полученной методом укола.

Рекомендуемая подготовка инокулята:

1. Выполните пересев свежей культуры.
2. Инкубируйте пересев при 35 °C в течение 24 ч.
3. Центрифугируйте полученную клеточную суспензию.
4. Промойте клетки.
5. Ресуспендируйте клетки в 10 мл физиологического раствора.

Описанная суспензия свежепересеянных клеток используется для проведения анализа витамина B12.

Методика микробиологического анализа

1. Приготовьте стандартные стерильные растворы витамина B12 из эталонного стандарта цианокобаламина.
2. Подготовьте ряд стандартных растворов с возрастающими концентрациями витамина B12.
3. Правильно разбавьте анализируемый материал неизвестного состава.
4. Нанесите анализируемую пробу и стандартные растворы аналогичным способом.
5. Инкубируйте посевы при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
6. Определите диаметр зон роста вокруг чашек или дисков, содержащих витамин B12.
7. Оцените содержание витамина B12 в анализируемом материале по реакции роста относительно стандартных растворов.

При микробиологическом анализе витамина B12 с использованием E.coli mutant 113-3 Davis ATCC 11105 хороший рост вокруг чашек с витамином B12 сопровождается увеличением диаметра зоны роста пропорционально повышению концентрации витамина B12 в чашке.

Технические характеристики

• Массовая концентрация при приготовлении: 51,5 г/л
• Конечное значение pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,00–7,40
• Реакция: реакция водного раствора концентрацией 5,15 % масс./об. при 25 °C
• Диапазон концентраций витамина B12 для анализа: 0–300 нг/мл
• Физическая форма: порошок
• Цвет и внешний вид порошка: однородный сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный средне-янтарный или слегка опалесцирующий гель в чашках Петри
• Упаковка: стеклянный флакон
• Условия хранения: 10–30 °C
• Требования к хранению: плотно закрытый контейнер в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч с использованием E.coli mutant 113-3 Davis ATCC 11105 в качестве тестового организма. Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при приготовлении и применении в соответствии с инструкцией на этикетке, а также при хранении в рекомендованных условиях и использовании до истечения срока годности.

Ограничения применения

• Свежеприготовленные чашки необходимо использовать в анализе; применение несвежих чашек может привести к ошибочным результатам.
• Перегрев среды или избыточная стерилизация приводят к неудовлетворительным результатам.
• Неправильное хранение порошка может вызвать образование комков из-за его гигроскопичности.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный средне-янтарный или слегка опалесцирующий гель.

Реакция

Реакция водного раствора концентрацией 5,15 % масс./об. при 25 °C.

• pH: 7,2 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,00–7,40

Условия хранения

Храните среду при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.

После вскрытия флакона:

• храните продукт в сухом виде;
• плотно закрывайте флакон для предотвращения образования комков;
• размещайте флакон в сухом проветриваемом помещении;
• защищайте продукт от экстремальных температур и источников воспламенения;
• плотно закрывайте контейнер после каждого использования.

Используйте свежеприготовленную среду и продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке. Рабочие характеристики среды сохраняются при применении в пределах установленного срока годности и соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Требования безопасности

Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.

При работе используйте:

• защитные перчатки;
• защитную одежду;
• средства защиты глаз;
• средства защиты лица.

При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила работы микробиологической лаборатории и стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами. Дополнительные требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо обеззараживать автоклавированием и/или уничтожать сжиганием.

Материалы, контактировавшие с образцом, следует обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими лаборатор