Агар для испытания витамина В12 HiMedia M110-100G (уп/500 гр)

Специальный агар для испытания витамина В₁₂ HiMedia M110-100G (производство HiMedia), предназначенный для микробиологического анализа методом диффузии в агар. Среда используется для количественного определения витамина В₁₂ с применением мутантного штамма E. coli 113-3 Davis ATCC 11105 в качестве тест-организма.

Принцип измерения

Агар для испытания витамина В₁₂ представляет собой сухую среду, которая содержит все питательные вещества, необходимые для роста мутантного штамма E. coli 113-3 Davis ATCC-11105, но полностью лишена витамина В₁₂. При добавлении витамина В₁₂ в заданных возрастающих концентрациях возникает рост микроорганизмов, который оценивается по диаметру зоны роста вокруг диска или лунки, содержащей исследуемый препарат.

Методика проведения анализа

Подготовка стандартных растворов и проб

1. Для приготовления стандартов используют стерильные растворы витамина В₁₂ (стандарт цианокобаламина).
2. Для определения содержания витамина В₁₂ в неизвестных материалах пробу надлежащим образом разводят и наносят аналогично разведениям стандартов.

Подготовка инокулята

1. Инокулят подготавливают путём субкультивирования из маточного штамма, созданного методом укольного посева.
2. Рекомендуется использовать свежесубкультивированные клетки, инкубированные при 35 °C в течение 24 часов, которые затем центрифугируют, промывают и суспендируют в 10 мл физиологического раствора.

Процедура анализа

1. В среду вносятся исследуемые образцы или стандарты.
2. После инкубации измеряется диаметр зоны роста с помощью зономера (zone reader).
3. Результаты считаются удовлетворительными при уровнях содержания витамина В₁₂ в диапазоне от 0 до 300 нг/мл.

Приготовление и стерилизация

1. Суспендировать 51,5 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов среды.
3. Тщательно перемешать для равномерного распределения возможного небольшого осадка.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа) в течение 15 минут.

Внимание: Перегрев или избыточная стерилизация приведут к неудовлетворительным результатам анализа.

Технические характеристики

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель в чашках Петри.
• Реакция (pH): 7,2 ± 0,2 при 25 °C (диапазон 7,00–7,40).

Область применения и ограничения

Среда применяется для микробиологического количественного анализа витамина В₁₂ в фармацевтических и биологических препаратах.

Ограничения:

• Необходимо использовать только свежеприготовленные чашки с агаром; использование старых сред может привести к ошибочным результатам.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Требования к хранению: хранить в сухом вентилируемом помещении, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания.
• Особенности: из-за гигроскопичности продукта после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание образования комков.

Утилизация

Утилизация использованных или непригодных препаратов должна осуществляться путем автоклавирования и/или сжигания в соответствии с установленными лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.

Дополнительная информация

• Сертификат: ФСЗ 2009/03707.
• Тип среды: Специальный агар.
• Состав соответствует методике Harrison et al. (1951).