Питательная агаровая среда «Агар Мюллера-Хинтона № 2 HiMedia M1084-500G (уп/500 гр)» производства HiMedia с низким содержанием тимина, тимидина, кальция и магния предназначена для диско-диффузионного определения чувствительности бактерий к антимикробным препаратам. Среда применяется для чистых культур распространённых и быстрорастущих аэробных и факультативно-анаэробных бактерий, но не рекомендуется для прихотливых микроорганизмов и строгих анаэробов.

Назначение

Среда рекомендована для тестирования чувствительности распространённых и быстрорастущих бактерий к антимикробным препаратам с использованием дисков по методу Бауэра—Кирби. Состав стандартизирован для низкого содержания тимина и тимидина, а также скорректированной концентрации ионов кальция и магния.

Продукт предназначен для диагностики in vitro и профессионального применения. Среда используется при исследовании чистых культур, выделенных из клинических образцов, включая мочу, кал и кровь.

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды:

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,1.

# Эквивалент настоя сердца и мяса.

## Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 38,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм², ориентировочно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип и интерпретация

Цель теста на чувствительность — спрогнозировать по результатам оценки in vitro вероятность успешного лечения инфекции пациента конкретным антимикробным препаратом.

Исходная формула агара Мюллера—Хинтона была разработана как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Позднее для культивирования патогенных видов Neisseria были разработаны другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение для определения устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфонамидам. В настоящее время агар Мюллера—Хинтона используется как тестовая среда для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам.

Агар Мюллера—Хинтона рекомендован для диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель. Методика описана в утверждённом стандарте NCCLS, в настоящее время CLSI — Института клинических и лабораторных стандартов. Среда выбрана CLSI по следующим причинам:

• обеспечивает воспроизводимость результатов тестирования чувствительности между партиями;
• содержит низкие уровни ингибиторов сульфонамидов, триметоприма и тетрациклина;
• поддерживает рост большинства нетребовательных патогенных бактерий;
• для среды накоплены значительный объём данных и практический опыт оценки рабочих характеристик.

Агар Мюллера—Хинтона № 2 используется для тестирования чувствительности быстрорастущих аэробных и факультативно-анаэробных бактерий, выделенных из клинических образцов. Бауэр, Кирби и соавторы рекомендовали эту среду для проведения тестов на чувствительность к антибиотикам с применением одного диска с высокой концентрацией препарата. Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности микроорганизмов принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности благодаря его воспроизводимости.

Среда разработана с низким содержанием тимина и тимидина; концентрации ионов кальция и магния скорректированы в соответствии с рекомендациями CLSI. Тимин и тимидин ингибируют активность сульфонамидов и триметоприма. Кальций и магний влияют на активность аминогликозидных антибиотиков.

Твёрдые вещества настоя HM B и ациказа обеспечивают поступление азотистых соединений, углерода, серы и других необходимых питательных веществ. Крахмал действует как защитный коллоид против токсичных веществ, присутствующих в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина; это оценивают по значениям минимальной подавляющей концентрации для Enterococcus faecalis при использовании комбинации сульфаметоксазол—триметоприм (SXT).

Концентрации ионов кальция и магния скорректированы для обеспечения количеств, рекомендованных CLSI, чтобы получать корректные значения минимальной подавляющей концентрации при тестировании аминогликозидов и Pseudomonas aeruginosa.

Процедура Бауэра—Кирби основана на диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, в агаровой среде. Для каждого диска используется одна концентрация антимикробного препарата; измеряемые диаметры зон подавления роста коррелируют со значениями минимальной подавляющей концентрации. Стандартизированную суспензию микроорганизма распределяют тампоном по всей поверхности среды. Затем на поверхность среды помещают бумажные диски с определённым количеством антимикробных препаратов, проводят инкубацию и измеряют зоны подавления роста вокруг каждого диска.

Тип образцов

Клинические образцы: чистые культуры, выделенные из мочи, кала, крови и других материалов.

Сбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами необходимо применять соответствующие методы обращения с образцами согласно действующим лабораторным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения

1. Среда рекомендована только для тестирования чувствительности чистых культур.
2. Плотность инокулюма может влиять на размер зоны подавления роста: слишком плотный инокулюм может привести к уменьшению зон, а слишком разреженный — к их увеличению.
3. Прихотливые микроорганизмы могут не расти на этой среде и могут требовать добавления крови.
4. Прихотливые анаэробные микроорганизмы могут не расти на этой среде.
5. Поскольку определение чувствительности к антимикробным препаратам проводят с использованием антибиотических дисков, необходимо соблюдать условия хранения дисков; нарушение хранения может повлиять на активность препаратов.
6. В отдельных случаях результаты определения чувствительности in vitro могут не соответствовать результатам лечения in vivo.

Рабочие характеристики и оценка

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при приготовлении и использовании согласно указаниям на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, свободно сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с гелем, содержащим 1,7 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 3,8 % масс./об. при 25 °C: pH 7,3 ± 0,1.

Диапазон pH

pH: 7,20–7,40.

Культуральные характеристики и контроль чувствительности

Тесты на чувствительность к антибиотикам проводят в соответствии с действующим ISO/TS 16782; среда должна соответствовать установленным приёмочным пределам. Рабочие характеристики среды проверяют в соответствии с руководствами CLSI и EUCAST.

Для тестирования Streptococcus pneumoniae среду дополняют 5 % конской крови и 20 мг/л НАД, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Для тестирования Haemophilus influenzae среду дополняют 5 % конской крови и 20 мг/л НАД, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Тест на чувствительность к антибиотикам

Различные диски испытывают со стандартными штаммами ATCC. Диаметры зон подавления роста измеряют после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч в соответствии с актуальным протоколом CLSI M6 и стандартом CLSI M100.

Содержание тимина и тимидина

Зоны вокруг указанных дисков характеризуют содержание тимина и тимидина в среде.

Содержание двухвалентных катионов

$ Зоны вокруг указанных дисков характеризуют содержание двухвалентных катионов в среде.

Культуральные характеристики и зоны подавления роста: