HiMedia M1084-100G Агар Мюллера-Хинтона №2

Питательная микробиологическая среда HiMedia M1084-100G Агар Мюллера-Хинтона №2 производства HiMedia с низким содержанием тимина, тимидина, кальция и магния. Применяется для определения чувствительности быстрорастущих аэробных и факультативно-анаэробных бактерий к антимикробным препаратам диско-диффузионным методом Бауэра—Кирби; среда не рекомендована для требовательных микроорганизмов.

Назначение

Агар Мюллера—Хинтона №2 предназначен для тестирования чувствительности распространённых и быстрорастущих бактерий к антимикробным препаратам с использованием дисков по методу Бауэра—Кирби.

Среда изготовлена с низким содержанием тимина и тимидина; концентрации ионов кальция и магния скорректированы в соответствии с рекомендациями CLSI. Продукт предназначен только для диагностики in vitro и профессионального применения.

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Сухие вещества настоя HM B эквивалентны настою говяжьего сердца. Ациказа эквивалентна кислотному гидролизату казеина.

• Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,1
• Происхождение компонентов: животное
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: ПЭВП (HDPE)
• Масса: 100 г

Принцип действия и интерпретация

Цель теста на чувствительность — оценить in vitro вероятность успешного лечения инфекции пациента определённым антимикробным препаратом.

Изначально состав Мюллера—Хинтона был разработан как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Позднее для культивирования патогенных видов Neisseria были разработаны другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфаниламидам.

В настоящее время агар Мюллера—Хинтона используют как тестовую среду для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Среда предназначена для диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель в соответствии с утверждёнными стандартами NCCLS, ныне CLSI.

Агар Мюллера—Хинтона выбран CLSI по следующим причинам:

1. Обеспечивает хорошую воспроизводимость результатов тестирования чувствительности от серии к серии.
2. Содержит низкие уровни ингибиторов сульфаниламидов, триметоприма и тетрациклина.
3. Поддерживает рост большинства неприхотливых патогенных бактерий.
4. Для среды накоплен значительный объём данных и практического опыта применения.

Агар Мюллера—Хинтона №2 используют для определения чувствительности быстрорастущих аэробных и факультативно-анаэробных бактерий, выделенных из клинических образцов. Kirby—Bauer рекомендовали эту среду для проведения тестов на чувствительность к антибиотикам с применением одного диска с высокой концентрацией препарата. Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов.

Среда разработана с низким содержанием тимина и тимидина; концентрации ионов кальция и магния отрегулированы в соответствии с рекомендациями CLSI. Среда не рекомендуется для требовательных микроорганизмов. Тимин и тимидин ингибируют активность сульфаниламидов и триметоприма, а кальций и магний влияют на активность аминогликозидных антибиотиков.

Сухие вещества настоя HM B и ациказа обеспечивают поступление азотистых соединений, углерода, серы и других необходимых питательных веществ. Крахмал действует как защитный коллоид, связывающий токсичные вещества, присутствующие в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии.

Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина, что определено по значениям минимальной ингибирующей концентрации для Enterococcus faecalis при использовании комбинации сульфаметоксазол—триметоприм (SXT). Концентрации ионов кальция и магния скорректированы для обеспечения количеств, рекомендованных CLSI, и получения корректных значений минимальной ингибирующей концентрации для аминогликозидов и Pseudomonas aeruginosa.

Метод Бауэра—Кирби основан на диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, в агаровый гель. В методе применяют диск с одной концентрацией антимикробного препарата; измеренные диаметры зон подавления роста сопоставляют со значениями минимальной ингибирующей концентрации. Стандартизованную суспензию микроорганизма равномерно наносят на всю поверхность среды. Затем на поверхность помещают бумажные диски с определённым количеством антимикробных препаратов, проводят инкубацию и измеряют зоны ингибирования вокруг каждого диска.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 38,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм, что соответствует примерно 0,10 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Тип образцов

Клинические образцы: чистые культуры, выделенные из мочи, кала, крови и других клинических материалов.

Сбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Среда предназначена только для тестирования чистых культур.
2. Плотность инокулюма может влиять на размер зоны подавления роста: слишком плотный инокулюм может привести к уменьшению зон, а слишком малый — к их увеличению.
3. Требовательные микроорганизмы могут не расти на этой среде; для них может потребоваться добавление крови.
4. Требовательные анаэробные микроорганизмы могут не расти на этой среде.
5. Поскольку определение чувствительности проводят с использованием дисков с антибиотиками, необходимо соблюдать условия хранения дисков; нарушение хранения может повлиять на активность препаратов.
6. В отдельных случаях результаты определения чувствительности in vitro могут не совпадать с результатами лечения in vivo.

Рабочие характеристики и оценка

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при приготовлении согласно инструкции на этикетке, использовании в пределах срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,7%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель, образующийся в чашках Петри.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 3,8 % масс./об. при 25 °C; pH 7,3 ± 0,1.
• Диапазон pH: 7,20–7,40.

Культуральные характеристики и контроль чувствительности

Тесты на чувствительность к антибиотикам выполняют в соответствии с действующей ISO/TS 16782; результаты должны соответствовать установленным пределам приемлемости. Рабочие характеристики среды проверяют согласно руководствам CLSI и EUCAST.

Для тестирования Streptococcus pneumoniae среду дополняют 5 % лошадиной крови и 20 мг/л НАД, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Для тестирования Haemophilus influenzae среду дополняют 5 % лошадиной крови и 20 мг/л НАД, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Тест на чувствительность к антибиотикам

Различные диски испытывают со стандартными штаммами ATCC. Диаметры зон подавления роста измеряют после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч согласно актуальному протоколу CLSI M6 и стандарту CLSI M100.

Содержание тимина и тимидина

Зоны для указанных дисков служат показателем содержания тимина и тимидина в среде.

Содержание двухвалентных катионов

Зоны для указанных дисков служат показателем содержания двухвалентных катионов в среде.