HiMedia M1064-100G Основа агара для идентификации листерий

Порошковая основа агара HiMedia M1064-100G «Основа агара для идентификации листерий» производства HiMedia с конечным pH 7,0 ± 0,2. Применяется для селективного выделения и идентификации видов Listeria из клинических, пищевых и водных образцов; для идентификации между видами Listeria требуются дополнительные биохимические исследования.

Назначение

Основа предназначена для приготовления агара PALCAM — селективной дифференциально-диагностической среды для выделения и идентификации видов Listeria, включая Listeria monocytogenes, из клинических и неклинических образцов.

Типы образцов

• Клинические образцы: фекалии, биологические жидкости.
• Пищевые образцы.
• Образцы воды.

Состав

Состав среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2.
• Реакция: 6,9 % водного раствора при 25 °C.
• Диапазон pH: 6,80–7,20.
• Форма выпуска: порошок.
• Тип продукта: стандартный.
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE).
• Происхождение: животное.
• Масса: 100 г.

Принцип действия и интерпретация

Род Listeria включает Listeria monocytogenes, Listeria ivanovii, Listeria seeligeri, Listeria welshimerii, Listeria innocua, Listeria grayi, Listeria murrayi и Listeria denitrificans. L. monocytogenes и L. ivanovii связаны с заболеваниями человека; патогенность L. ivanovii считается неопределённой.

L. monocytogenes встречается в различных средах, включая нормальную микрофлору здоровых жвачных животных, желудочно-кишечный тракт людей без симптомов заболевания, речную воду, сточные воды, почву, силос, удобрения и разлагающуюся растительность.

Агар для идентификации листерий также известен как агар PALCAM — полимиксин-акрифлавин-хлорид лития-цефтазидим-эскулин-маннитоловый агар. Среда разработана для выделения L. monocytogenes из пищевых продуктов. Высокая селективность среды обусловлена наличием хлорида лития, цефтазидима, полимиксина B и гидрохлорида акрифлавина.

Среда PALCAM является дифференциально-диагностической и использует две индикаторные системы:

• эскулин и цитрат железа;
• маннитол и феноловый красный.

Функции компонентов:

• Пептон обеспечивает микроорганизмы источниками углерода и азота, длинноцепочечными аминокислотами, витаминами и необходимыми питательными веществами для роста.
• Декстроза (глюкоза), крахмал и маннитол служат источниками углеводов и энергии.
• Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды.
• Феноловый красный является индикаторным красителем pH и изменяет окраску при изменении кислотности среды.
• L. monocytogenes гидролизует эскулин с образованием эскулетина и декстрозы.
• Эскулетин реагирует с цитратом аммонийного железа с образованием коричнево-чёрного комплекса, формирующегося в виде чёрного ореола вокруг колоний.
• L. monocytogenes не ферментирует маннитол. Контаминирующие микроорганизмы, включая энтерококки и стафилококки, ферментируют маннитол; это проявляется изменением окраски среды с красной на жёлтую.
• В микроаэрофильных условиях подавляется рост строгих аэробов, включая виды Bacillus и Pseudomonas.
• Добавление яичного желтка в концентрации 2,5 % об./об. в агар PALCAM может способствовать восстановлению повреждённых клеток.
• Среда с добавленной кровью при нанесении поверх агара PALCAM позволяет дифференцировать и подсчитывать гемолитические виды Listeria.

В зависимости от типа образца перед посевом на агар PALCAM следует использовать бульон для селективного обогащения:

• для молочных продуктов обычно применяют среду для селективного обогащения Listeria;
• для мяса и птицы применяют среду для селективного обогащения Listeria UVM (M890A) и вторичный бульон для обогащения по Фрейзеру (M1083).

На агаре PALCAM после посева и инкубации при 35 °C в течение 24–48 ч в аэробных или микроаэрофильных условиях колонии Listeria имеют серо-зелёную окраску и чёрный осадок.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 34,44 г порошка в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки PALCAM (FD061).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в микроаэрофильных условиях с добавлением селективной добавки PALCAM (FD061) после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Сбор и обращение с образцами

1. Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным методическим рекомендациям.
2. Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно методическим рекомендациям.
3. Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно методическим рекомендациям и местным нормативам.
4. После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, легко сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с гелем 1,3%-ного агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

Реакция

Реакция 6,9 % водного раствора при 25 °C: pH 7,0 ± 0,2.

Диапазон pH

6,80–7,20.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Сухую основу храните в плотно закрытом контейнере.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом состоянии для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования плотно закрывайте контейнер.
• Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• Рабочие характеристики среды гарантируются при использовании в соответствии с указаниями на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Ограничения применения

1. Отдельные микроорганизмы различаются по требованиям к условиям роста и могут демонстрировать неодинаковые характеристики роста на среде.
2. Каждая партия среды испытана на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). Для любого конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, пользователю рекомендуется валидировать среду с учётом особенностей предполагаемого применения