HiMedia M1063-500G M17 агар с глицерофосфатом

Сухая питательная среда HiMedia M1063-500G M17 агар с глицерофосфатом для культивирования молочнокислых стрептококков и проведения анализа бляшек молочнокислых бактериофагов. Применяется для анализа молочных проб, включая селективный подсчёт Streptococcus thermophilus в йогуртах, и поддержания стартовых культур для производства сыра и йогурта.

Область применения

Среда M17 агар рекомендуется Международной молочной федерацией (IDF) и Американской ассоциацией общественного здравоохранения (APHA) для:

• культивирования и количественного учёта молочнокислых стрептококков;
• анализа бляшек молочнокислых бактериофагов (изучение морфологии бляшек и лизогении);
• выделения и подсчёта Streptococcus thermophilus из йогурта;
• выявления мутантов стрептококков, не ферментирующих лактозу.

Принцип измерения

Среда основана на рецептуре Terzaghi и Sandine. Молочнокислые стрептококки являются требовательными к питанию организмами, поэтому состав среды включает комплекс компонентов для оптимального роста:

• Источники углерода и азота: соевый пептон, биопептон, экстракт дрожжей и пептон HM B обеспечивают необходимые азотистые соединения, комплекс витаминов B и другие факторы роста.
• Энергетический субстрат: лактоза выступает в качестве ферментируемого углевода.
• Стимуляторы роста: аскорбиновая кислота стимулирует рост молочнокислых стрептококков, а сульфат магния обеспечивает организм необходимыми ионами.
• Буферизация: динатрий-β-глицерофосфат поддерживает уровень pH выше 5,7. Это критически важно, так как более низкий pH приводит к повреждению клеток и снижению выхода молочнокислых стрептококков. Кроме того, глицерофосфат не образует осадка с кальцием, что необходимо для анализа бляшек бактериофагов.
• Селективность: динатрий-β-глицерофосфат подавляет рост Lactobacillus bulgaricus.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Растворить 52,25 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C и давлении ≈0,1 МПа (15 фунтов) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Посев и инкубация

Для подсчёта стрептококков рекомендуется использовать метод посева массой или метод «штыкования» (внесение в агар, расплавленный и охлаждённый до 50–55 °C).

• Инкубация: 24 часа при температуре 42 °C.
• Оценка результатов:
  • Лактозоположительные колонии стрептококков становятся видимыми через 15 часов; через 5 дней их диаметр достигает 3–4 мм.
  • Лактозоотрицательные колонии имеют диаметр около 1 мм.
  • Присутствие бактериофагов определяется по появлению характерных бляшек на фоне бактериального роста.

Важно: Слишком длительная инкубация или пониженная температура могут вызвать морфологические изменения колоний, что затруднит их идентификацию.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Конечный pH (при 25 °C): 7,1 ± 0,2

Общие параметры

Контроль качества

Внешний вид и свойства

• Вид: однородный свободнотекущий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,0% агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-жёлтый, слегка опалесцирующий гель в чашках Петри.
• Реакция: pH 7,1 ± 0,2 (для 5,23% в/в водного раствора при 25 °C).
• Диапазон pH: 6,90–7,30.

Культуральные характеристики

Характеристики определены после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: Продукт гигроскопичен. После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть для предотвращения образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

• Безопасность: При работе использовать защитные перчатки, спецодежду и средства защиты глаз/лица. Соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности.
• Утилизация: Все загрязнённые материалы и остатки среды перед утилизацией должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации.