HiMedia M1063-500G M17 агар с глицерофосфатом

Питательная агаризованная среда HiMedia M1063-500G M17 агар с глицерофосфатом производства HiMedia в порошковой форме предназначена для культивирования молочнокислых стрептококков и определения молочнокислых бактериофагов методом подсчёта бляшек. Среда применяется для анализа молочных образцов, поддерживает pH выше 5,7 и подавляет рост Lactobacillus bulgaricus.

Назначение и область применения

M17 агар с глицерофосфатом рекомендован для:

• культивирования молочнокислых стрептококков;
• количественного определения молочнокислых стрептококков и их бактериофагов методом подсчёта бляшек;
• изучения морфологии бляшек и лизогении;
• селективного количественного определения Streptococcus thermophilus в йогурте;
• культивирования и поддержания заквасочных культур, используемых при производстве сыра и йогурта;
• выявления стрептококковых мутантов, не ферментирующих лактозу.

Тип образцов: молочные продукты и другие молочные образцы.

Среда M17 основана на составе, описанном Terzaghi и Sandine для культивирования и количественного определения молочнокислых стрептококков и их бактериофагов. Применение среды для культивирования молочнокислых стрептококков также рекомендовано Американской ассоциацией общественного здравоохранения (APHA), а для селективного определения Streptococcus thermophilus в йогурте — Международной молочной федерацией (IDF).

Состав

Состав на 1 л очищенной или дистиллированной воды:

Итоговая реакция среды при 25 °C: pH 7,1 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия рабочим параметрам.

Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту.

Принцип действия и интерпретация

Молочнокислые стрептококки требовательны к питательным условиям и нуждаются в сложных средах для оптимального роста. Соевый пептон, дрожжевой экстракт, пептон HM B и биопептон обеспечивают среду углеродистыми и азотистыми соединениями, витаминами группы B и другими необходимыми факторами роста.

Лактоза является ферментируемым углеводом. Аскорбиновая кислота стимулирует рост молочнокислых стрептококков. Сульфат магния обеспечивает микроорганизмы необходимыми ионами.

Динатриевый β-глицерофосфат поддерживает pH среды выше 5,7. Сохранение pH имеет важное значение: снижение pH приводит к повреждению молочнокислых стрептококков и уменьшению их выделения. Глицерофосфат не образует осадка с кальцием, необходимым для определения молочнокислых бактериофагов методом подсчёта бляшек. Динатриевый глицерофосфат подавляет Lactobacillus bulgaricus.

Наличие бактериофагов выявляют по появлению характерных бляшек на фоне роста бактерий.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 52,25 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм, что соответствует примерно 0,10 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите приготовленную среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Пробоподготовка, посев и инкубация

Для количественного определения стрептококков рекомендуется поверхностный посев или посев в толщу среды с использованием расплавленного и охлаждённого до 50–55 °C агара.

Инкубируйте посевы при 42 °C в течение 24 ч. При указанных условиях все выросшие колонии могут быть стрептококками.

Более продолжительная инкубация или более низкая температура могут вызвать морфологические изменения колоний, затрудняющие их распознавание.

Колонии стрептококков, положительные по ферментации лактозы:

• становятся видимыми через 15 ч;
• через 5 суток могут достигать диаметра около 3–4 мм.

Колонии стрептококков, отрицательные по ферментации лактозы, имеют диаметр около 1 мм.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Технические характеристики

• Наименование: M17 агар с глицерофосфатом
• Артикул: M1063-500G
• Производитель: HiMedia
• Назначение изделия: агаризованная питательная среда
• Физическая форма: порошок
• Масса: 500 г
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: HDPE (полиэтилен высокой плотности)
• Происхождение: животное
• Расчётная концентрация для приготовления: 52,25 г/л
• Итоговая реакция среды при 25 °C: pH 7,1 ± 0,2
• Диапазон pH по контролю качества: 6,90–7,30
• Режим стерилизации: автоклавирование при 121 °C в течение 15 мин
• Давление при стерилизации: 15 фунтов на кв. дюйм, примерно 0,10 МПа
• Температура охлаждения перед разливом: 45–50 °C
• Температура расплавленного агара для посева в толщу: 50–55 °C
• Рекомендуемая температура инкубации посевов: 42 °C
• Рекомендуемая продолжительность инкубации посевов: 24 ч

Контроль качества

Внешний вид и свойства среды

• Внешний вид порошка: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,0%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: светло-жёлтый слегка опалесцирующий гель, формирующийся в чашках Петри.
• Реакция: реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 5,23 % при 25 °C.
• pH: 7,1 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,90–7,30.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения сухого продукта: плотно закрытая ёмкость в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• Условия хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• После вскрытия: хранить продукт в сухом состоянии, плотно закрывая флакон.
• Требование к упаковке: плотно закрывать ёмкость после каждого использования.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Продукт обладает гигроскопичностью. При недостаточно плотном закрытии или ненадлежащем хранении возможно образование комков. Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в пределах установленного срока годности и при соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Ограничения применения

Поддержание pH имеет критическое значение для восстановления молочнокислых стрептококков. Снижение pH приводит к повреждению микроорганизмов и уменьшению их выделения.

Безопасность и меры предосторожности

• Перед вскрытием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила работы микробиологической лаборатории при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами применяйте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными методическими требованиями.
• Требования безопасности следует уточнять в соответствующих паспортах безопасности.
• Использованные или непригодные препараты необходимо безопасно утилизировать автоклавированием и/или сжиганием.
• Материалы, контактировавшие с образцами, необходимо обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими методиками лабораторной работы.
• Перед удалением загрязнённых материалов их необходимо стерилизовать автоклавированием.

Оценка рабочих характеристик

Рабочие характеристики среды ожидаются при приготовлении и применении в соответствии с указаниями на этикетке, а также