М 17 агар с глицерофосфатом HiMedia M1063-100G (уп/100 гр)

Питательная агаровая среда М 17 агар с глицерофосфатом HiMedia M1063-100G (уп/100 гр) предназначена для культивирования молочнокислых стрептококков и определения молочнокислых бактериофагов методом бляшек. Среда применяется для анализа молочных образцов, поддерживает pH выше 5,7 и требует автоклавирования при 121 °C в течение 15 мин перед использованием.

Назначение

Среда рекомендована для:

• культивирования молочнокислых стрептококков;
• количественного определения молочнокислых стрептококков;
• определения молочнокислых бактериофагов методом бляшек;
• изучения морфологии бляшек и лизогении;
• выделения и количественного определения Streptococcus thermophilus из йогурта;
• культивирования и поддержания заквасочных культур, используемых при производстве сыра и йогурта;
• выявления мутантов стрептококков, не ферментирующих лактозу.

Тип образца: молочные продукты и молочные образцы.

Принцип действия и интерпретация результатов

Среда M17 основана на рецептуре, разработанной для культивирования и количественного определения молочнокислых стрептококков и их бактериофагов.

Молочнокислые стрептококки требовательны к питательным условиям и нуждаются в сложных средах для оптимального роста. Соевый пептон, дрожжевой экстракт, пептон HM B и биопептон обеспечивают микроорганизмы углеродистыми и азотистыми соединениями, витаминами группы B и другими необходимыми факторами роста. Лактоза является сбраживаемым углеводом, аскорбиновая кислота стимулирует рост молочнокислых стрептококков. Сульфат магния обеспечивает микроорганизмы необходимыми ионами.

Динатрий-β-глицерофосфат поддерживает pH среды выше 5,7. Поддержание pH имеет критическое значение: снижение pH может приводить к повреждению молочнокислых стрептококков и уменьшению их выделения. Глицерофосфат не образует осадка с кальцием, необходимым для определения молочнокислых бактериофагов методом бляшек. Динатрий-глицерофосфат подавляет рост Lactobacillus bulgaricus.

При наличии бактериофагов на фоне бактериального роста появляются характерные зоны лизиса — бляшки. Лактозоположительные колонии стрептококков становятся видимыми примерно через 15 ч инкубации; через 5 суток их диаметр может достигать 3–4 мм. Лактозоотрицательные колонии имеют диаметр около 1 мм.

Состав

Содержание компонентов указано в г/л.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих характеристик. Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту.

Конечный pH при 25 °C: 7,1 ± 0,2.

Методика приготовления среды

1. Взвесьте 52,25 г порошка и суспендируйте в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Отбор и обработка образцов

Для количественного определения стрептококков рекомендуется выполнять посев в толщу среды или методом прокалывания расплавленным агаром, охлаждённым до 50–55 °C, с последующей инкубацией при 42 °C в течение 24 ч.

При указанных условиях все выросшие колонии могут относиться к стрептококкам. Более длительная инкубация или использование более низкой температуры может вызвать морфологические изменения колоний, затрудняющие их распознавание.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид: однородный сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Желирование: плотный гель, сопоставимый с гелем, приготовленным из 1,0 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется светло-жёлтый слегка опалесцирующий гель.

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 5,23 % масс./об. при 25 °C.

pH: 6,90–7,30.

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ограничения применения

Поддержание pH имеет критическое значение. Снижение pH может привести к повреждению молочнокислых стрептококков и снижению их выделения.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухого препарата: 10–30 °C.
• Условия хранения сухого препарата: плотно закрытая ёмкость.
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия необходимо плотно закрывать флакон и хранить препарат в сухом виде.
• Место хранения: сухая вентилируемая зона, защищённая от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования ёмкость необходимо герметично закрывать.

Препарат обладает гигроскопичностью. Нарушение условий хранения или недостаточно плотное закрытие флакона может привести к образованию комков. Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение указанного срока годности.

Меры предосторожности

Перед вскрытием контейнера прочитайте этикетку. При работе используйте:

• защитные перчатки;
• защитную одежду;
• средства защиты глаз;
• средства защиты лица.

При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики и стандартные меры предосторожности, установленные для работы с биологическими образцами. Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо безопасно утилизировать после автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов следует соблюдать действующие лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцом, должны быть обеззаражены и у