HiMedia M1048-500G Модифицированная основа M-Enterococcus агара

Сухая питательная среда HiMedia M1048-500G Модифицированная основа M-Enterococcus агара для выделения энтерококков из проб воды. Применяется методом мембранной фильтрации в сочетании с железо-эскулиновым агаром для идентификации бактерий; вес упаковки 500 г.

Принцип измерения

Среда разработана для подсчета и идентификации энтерококков при контроле санитарного качества рекреационных вод, а также для анализа питьевой, пресной, эстуарной, морской воды и проб из мест выращивания моллюсков.

Основа среды содержит желатиновый пептон и дрожжевой экстракт, которые обеспечивают углеводное и азотистое питание, минералы, витамины и другие факторы роста. Хлорид натрия поддерживает изотонические условия и обеспечивает необходимые ионы. Селективность среды обеспечивается за счет добавления азида натрия, циклогексимида и налидиксовой кислоты, которые подавляют рост большинства бактерий и грибов.

Эскулин гидролизуется бактериальными ферментами до эскулетина и декстрозы. Добавление TTC (трифенилтетразолия хлорида) позволяет энтерококкам восстанавливать его до нерастворимого формазана — красного комплекса внутри бактериальной клетки, что приводит к появлению розовых или красных колоний.

Методика проведения анализа

Для количественного определения и идентификации энтерококков используется комбинация двух сред: модифицированной основы M-Enterococcus агара (селективная среда) и железо-эскулинового агара |M1044| (подтверждающая среда, основанная на способности организмов гидролизовать эскулин).

Процедура анализа

1. Мембранный фильтр, через который была профильтрована проба воды, помещают на чашку с модифицированным M-Enterococcus агаром.
2. Инкубируют при температуре 41 °C в течение 48 часов.
3. После инкубации фильтр переносят на чашку с железо-эскулиновым агаром |M1044| и инкубируют при 41 °C в течение 20 минут.
4. Подсчитывают колонии на мембранных фильтрах, содержащих от 20 до 60 розовых или красных колоний с черным или красно-коричневым осадком на нижней стороне мембраны. При необходимости используют увеличительное стекло и флуоресцентную лампу.

Расчет результатов

Для окончательного расчета используется следующая формула: $\text{Энтерококков/100 мл} = \frac{\text{Количество энтерококковых колоний}}{\text{Объем профильтрованного образца (мл)}} \times 100$

Приготовление и стерилизация

1. Растворить 71,45 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx 0,1$ МПа) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.
5. Асептически добавить 15 мл стерильного 1 % раствора TTC (FD057).
6. Тщательно перемешать и разлить по стерильным чашкам Петри.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Физико-химические показатели

• Конечный pH (при 25 °C): 7,1 $\pm$ 0,2
• Диапазон pH: 6,90–7,30
• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до желтого цвета
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаром
• Цвет и прозрачность готовой среды: желтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель

Дополнительные параметры

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 40–42 °C в течение 48 часов с добавлением стерильного 1 % раствора TTC (FD057) на модифицированном M-Enterococcus агаре (M1048) и при 40–42 °C в течение 20 минут на железо-эскулиновом агаре |M1044|.

Область применения

Среда предназначена для анализа проб воды (питьевой, пресной, морской, эстуарной) и проб из мест выращивания моллюсков. Используется в экологическом мониторинге и контроле санитарного состояния водоемов.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения (сухой и готовой среды): 2–8 °C.
• Хранить в плотно закрытом контейнере в сухом вентилируемом помещении, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания.
• Из-за гигроскопичности продукта после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков.

Ограничения и предостережения

• Различные организмы могут иметь разные требования к росту и демонстрировать вариативность паттернов роста на данной среде.
• Каждая партия среды протестирована на организмах, указанных в сертификате анализа (COA). При необходимости использования для специфических микроорганизмов, не указанных в COA, рекомендуется провести валидацию среды.
• При работе со средой и образцами следует соблюдать правила надлежащей микробиологической лабораторной практики и использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица).