М-агар для энтерококков, модифицированный, для технологии мембранных фильтров HiMedia M1048-100G (уп/100 гр)

Питательная агаризованная среда «М-агар для энтерококков, модифицированный, для технологии мембранных фильтров HiMedia M1048-100G (уп/100 гр)» предназначена для выделения энтерококков из проб воды методом мембранной фильтрации. Среда применяется для количественного определения и идентификации энтерококков, а подтверждение идентификации проводят на агаре с эскулином и железом M1044.

Назначение и область применения

М-агар для энтерококков, модифицированный, используют для выделения и количественного определения энтерококков в пробах воды методом мембранной фильтрации совместно с агаром с эскулином и железом M1044.

Тип образца: пробы воды.

Среда применяется для анализа питьевой, пресной, эстуарной и морской воды, а также воды из районов выращивания моллюсков. Методика предназначена для санитарно-бактериологического контроля рекреационных вод и количественной оценки содержания энтерококков.

Сертификат: ФСЗ 2009/03709.

Назначение изделия: агар.

Состав

Форма выпуска среды: порошок.

Состав, г/л:

Конечный pH при 25 °C: 7,1 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип измерения и действия компонентов

Желатиновый пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают среду углеродными и азотистыми питательными веществами, минеральными компонентами, витаминами и другими факторами роста.

Хлорид натрия поддерживает изотонические условия среды и обеспечивает микроорганизмы необходимыми ионами.

Азид натрия, циклогексимид и налидиксовая кислота подавляют рост большого количества бактерий и грибов, обеспечивая селективность среды.

Эскулин гидролизуется бактериальными ферментами с образованием эскулетина и декстрозы.

Трифенилтетразолий хлорид (TTC) восстанавливается энтерококками до нерастворимого формазана — красного окрашенного комплекса внутри бактериальной клетки. В результате колонии приобретают окраску от розовой до красной.

Подготовка среды

1. Суспендируйте 71,45 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения, чтобы полностью растворить среду.
3. Простерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (ориентировочно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 15 мл стерильного 1%-ного раствора TTC FD057.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика проведения анализа

Для количественного определения и идентификации энтерококков используют две питательные среды: модифицированный М-агар для энтерококков M1048 как селективную среду и агар с эскулином и железом M1044 для подтверждения идентификации колоний по способности микроорганизмов гидролизовать эскулин.

1. Отфильтруйте пробу воды через мембранный фильтр.
2. Поместите использованный мембранный фильтр на чашку с модифицированным М-агаром для энтерококков.
3. Инкубируйте при 41 °C в течение 48 ч.
4. После инкубации перенесите мембранный фильтр на чашку с агаром с эскулином и железом M1044.
5. Дополнительно инкубируйте при 41 °C в течение 20 мин.
6. После инкубации подсчитайте и зарегистрируйте колонии на мембранных фильтрах, содержащих от 20 до 60 розовых или красных колоний с чёрным либо красно-коричневым осадком на нижней стороне мембраны.
7. При необходимости для подсчёта видимых колоний используйте увеличительное стекло и люминесцентную лампу.

Расчёт содержания энтерококков выполняют по формуле:

Энтерококки/100 мл = (число колоний энтерококков / объём отфильтрованной пробы, мл) × 100

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный, свободно текущий порошок кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с гелем 1,5%-ного агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель жёлтого цвета.

Реакция и pH

Реакция: реакция 7,14%-ного водного раствора при 25 °C.

pH: 7,1 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,90–7,30.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 40–42 °C в течение 48 ч на модифицированном М-агаре для энтерококков M1048 с добавлением стерильного 1%-ного раствора TTC FD057 и после инкубации при 40–42 °C в течение 20 мин на агаре с эскулином и железом M1044.

Ключ: * соответствующие номера WDCM.

Интерпретация результатов

Модифицированный М-агар для энтерококков содержит селективные компоненты, подавляющие рост сопутствующих бактерий и грибов. Энтерококки восстанавливают TTC с образованием формазана, поэтому на мембранном фильтре формируются колонии от розового до красного цвета.

При последующем переносе фильтра на агар с эскулином и железом M1044 гидролиз эскулина подтверждают по появлению чёрного или коричневого осадка на нижней стороне мембранного фильтра под отдельной колонией.

Ограничения применения

• Разные микроорганизмы имеют индивидуальные требования к условиям роста и могут демонстрировать на среде различные характеристики роста.
• Каждая партия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа.
• При использовании среды для конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, пользователь должен самостоятельно валидировать пригодность среды с учётом собственных требований.

Требования безопасности

Перед вскрытием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.

При работе используйте:

• защитные перчатки;
• защитную одежду;
• средства защиты глаз;
• средства защиты лица.

При обращении с образцами и культурами соблю