М-агар для энтерококков, модифицированный, для технологии мембранных фильтров HiMedia M1048-100G (уп/100 гр)

Сухая питательная среда М-агар для энтерококков, модифицированный, для технологии мембранных фильтров HiMedia M1048-100G. Применяется для выделения и количественного определения энтерококков в пробах воды; содержит селективные агенты для подавления роста бактерий и грибов.

Область применения

Среда рекомендована для выделения энтерококков из проб воды с использованием метода мембранной фильтрации. Используется для анализа санитарного качества рекреационных вод, а также для обнаружения и количественного определения энтерококков в питьевой, пресной, эстуарной и морской воде, в том числе в пробах с моллюсками.

Принцип измерения

Среда содержит желатиновый пептон и дрожжевой экстракт, обеспечивающие углеродные и азотистые питательные вещества, минералы, витамины и другие факторы роста. Хлорид натрия поддерживает изотонические условия и обеспечивает организм необходимыми ионами.

Селективность среды обеспечивается добавлением азида натрия, циклогексимида и налидиксовой кислоты, которые подавляют рост большого количества сопутствующих бактерий и грибов. Эскулин гидролизуется бактериальными ферментами до эскулетина и декстрозы. Добавление TTC (трифенилтетразолия хлорида) позволяет энтерококкам восстанавливать его до нерастворимого формазана — красного комплекса внутри бактериальной клетки, в результате чего колонии приобретают розовый или красный цвет.

Методика проведения анализа

Для количественного определения и идентификации энтерококков используется комбинация двух сред: селективного М-агара для энтерококков (M1048) и агара с эскулином и железом (M1044).

Процедура анализа

1. Мембранный фильтр, использованный для фильтрации пробы воды, помещают на чашку с М-агаром для энтерококков (M1048).
2. Инкубируют при температуре 41 °C в течение 48 часов.
3. После инкубации фильтр переносят на чашку с агаром с эскулином и железом (M1044) и инкубируют при 41 °C в течение 20 минут.
4. Подсчитывают колонии на фильтрах, содержащих от 20 до 60 розовых или красных колоний с черным или красно-коричневым осадком на нижней стороне мембраны. При необходимости используют увеличительное стекло и флуоресцентную лампу.

Расчет результатов

Для окончального расчета используется следующая формула: $\text{Энтерококков/100 мл} = \frac{\text{Количество энтерококковых колоний}}{\text{Объем отфильтрованной пробы (мл)}} \times 100$

Приготовление и стерилизация

1. Суспендировать 71,45 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревать до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx 0,1$ МПа) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C и асептически добавить 15 мл стерильного 1 % раствора TTC (FD057).
5. Тщательно перемешать и разлить по стерильным чашкам Петри.

Технические характеристики

Состав, г/л:

• Конечный pH (при 25 °C): 7,1 $\pm$ 0,2
• Внешний вид: однородный свободнотекучий порошок от кремового до желтого цвета
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % агаром
• Цвет и прозрачность готовой среды: желтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель
• Диапазон pH: 6,90–7,30

Дополнительные параметры:

Контроль качества и культурные характеристики

Характеристики оцениваются после инкубации при 40–42 °C в течение 48 часов с добавлением стерильного 1 % раствора TTC (FD057) на М-агаре для энтерококков (M1048) и при 40–42 °C в течение 20 минут на агаре с эскулином и железом (M1044).

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение сухой и готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Требования к хранению: в плотно закрытом флаконе в сухом вентилируемом месте, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания. Из-за гигроскопичности продукта неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.

Ограничения и меры предосторожности

• Отдельные микроорганизмы могут иметь различные требования к росту и демонстрировать вариативные паттерны на данной среде.
• Рекомендуется проводить валидацию среды для конкретных микроорганизмов, не указанных в сертификате анализа (COA), исходя из уникальных требований пользователя.
• При работе со средой и пробами необходимо использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, защитная одежда, очки) и соблюдать правила микробиологической безопасности.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты подлежат безопасному удалению путем автоклавирования и/или сжигания в соответствии с установленными лабораторными процедурами по утилизации инфекционных материалов.