HiMedia M1044-100G Эскулин-железный агар

Сухая питательная среда HiMedia M1044-100G Эскулин-железный агар для подтверждения энтерококковых колоний. Применяется при анализе проб воды методом мембранной фильтрации в сочетании с модифицированным агаром M-Enterococcus (M1048).

Область применения

Среда рекомендована для верификации энтерококковых колоний на мембранных фильтрах, через которые были профильтрованы пробы воды и которые предварительно инкубировались на модифицированном агаре M-Enterococcus (M1048). Используется для анализа свежей и морской рекреационной воды согласно рекомендациям APHA.

Принцип измерения и интерпретация

Энтерококки являются индикаторами санитарного качества рекреационных вод, так как присутствуют в фекалиях человека и теплокровных животных.

Принцип работы основан на способности энтерококков гидролизовать эскулин с образованием эскулетина и декстрозы. Эскулетин вступает в реакцию с солью железа (цитратом аммония-железа(III)), в результате чего вокруг колоний образуется комплекс темно-коричневого или черного цвета.

Методика проведения анализа (мембранная фильтрация)

1. Мембранный фильтр с пробой воды асептически помещают на поверхность модифицированного агара M-Enterococcus (M1048).
2. Инкубируют при температуре 40–42 °C в течение 48 часов.
3. После инкубации мембрану асептически переносят на чашку с эскулин-железным агаром (M1044).
4. Инкубируют при температуре 40–42 °C в течение 20 минут.
5. Подсчитывают количество розовых или красных колоний, имеющих черный или красно-коричневый осадок на нижней стороне мембраны. При необходимости используют лупу или флуоресцентную лампу.

Расчет итогового значения: $\text{Enterococci/100ml} = \frac{\text{Количество энтерококковых колоний}}{\text{Объем профильтрованной пробы (мл)}} \times 100$

Приготовление и стерилизация

1. Растворить 16,5 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревать до кипения при постоянном перемешивании.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx 0,1$ МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C и разлить по стерильным чашкам Петри слоем 4–5 мм.

Технические характеристики

Состав, г/л:

• Конечный pH (при 25 °C): 7,1 $\pm$ 0,2
• Внешний вид: светло-желтый или светло-коричневый однородный свободнотекущий порошок
• Свойства геля: плотный, сопоставим с 1,5 % агаровым гелем
• Цвет и прозрачность готовой среды: янтарный, прозрачный или слегка опалесцирующий гель
• Диапазон pH: 6,90–7,30

Дополнительные параметры:

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 40–42 °C в течение 18–24 ч на модифицированном агаре M-Enterococcus (M1048) и последующей инкубации в течение 20 минут при 40–42 °C на эскулин-железном агаре (M1044).

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать для предотвращения комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Ограничения и меры предосторожности

• Для полной идентификации микроорганизмов необходимо проведение дополнительных биохимических и серологических тестов.
• При работе с пробами и культурами следует соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности, использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица.
• Загрязненные материалы подлежат обязательному автоклавированию перед утилизацией.