Желчно-эскулиновый агар HiMedia M1035-100G (уп/100 гр)

Питательная селективная среда Желчно-эскулиновый агар HiMedia M1035-100G (уп/100 гр) — порошковый агар с канамицином для микробиологического анализа. Среда предназначена для селективного выделения и предположительной идентификации бактерий группы Bacteroides fragilis из смешанной микрофлоры; для полной идентификации требуются дополнительные биохимические и серологические тесты.

Назначение

Желчно-эскулиновый агар с канамицином HiMedia M1035-100G применяют для селективного выделения и предположительной идентификации бактерий группы Bacteroides fragilis из смешанной микрофлоры.

Тип образца: изолированный микроорганизм.

Назначение изделия: агар.

Регистрационный документ: ФСЗ 2009/03709.

Состав

Содержание компонентов приведено в граммах на 1 л среды.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заявленных параметров эффективности.

Обозначения:

• # — эквивалент мясного экстракта.
• φ — эквивалент бычьей желчи Oxgall.

Технические характеристики

• Конечный pH при 25 °C: 7,1 ± 0,2.
• Расчётная концентрация водного раствора: 4,46 % масс./об.
• Рабочая реакция раствора при 25 °C: pH 7,1 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация

Групповые стрептококки D имеют в клеточной стенке антиген липотейхоевой кислоты группы D. Представители бывшей группы D, являющиеся преимущественно нормальными обитателями желудочно-кишечного тракта человека, называются фекальными стрептококками или энтерококками.

Энтерококки и стрептококки группы D гидролизуют эскулин с образованием эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с цитратом железа с образованием коричневато-чёрного осадка. Гидролиз эскулина используется для идентификации энтерококков. На среде вокруг колоний, гидролизующих эскулин, формируется зона тёмно-коричневого или чёрного осадка.

Желчно-эскулиновый агар первоначально был разработан для выделения и идентификации стрептококков группы D из пищевых продуктов. Среда позволяет дифференцировать стрептококки группы D и стрептококки, не относящиеся к группе D. Гидролиз эскулина также может использоваться для дифференциации представителей Enterobacteriaceae, Klebsiella, Enterobacter и Serratia от других родов семейства Enterobacteriaceae. Для идентификации энтерококков необходимо выполнять дополнительные тесты, включая определение устойчивости к соли.

Желчно-эскулиновый агар с канамицином представляет собой модификацию исходной рецептуры. Канамицин добавлен в обогащённый желчно-эскулиновый агар, содержащий гемин и витамин K₁. Гемин и витамин K₁ обогащают среду и усиливают рост видов Bacteroides. Канамицин селективно поддерживает рост Bacteroides fragilis и подавляет рост факультативно-анаэробных и аэробных грамотрицательных палочек.

Анаэробы, не способные гидролизовать эскулин, не образуют на среде коричневых или чёрных пигментированных колоний. Перед инкубацией чашки следует восстановить, выдерживая их в анаэробном контейнере в течение 18–24 ч.

Желатиновый пептон и мясной пептон B служат источниками углерода, азота, аминокислот, витаминов и необходимых питательных веществ для роста. Желчь и канамицин подавляют большинство сопутствующих микроорганизмов. Эскулин гидролизуется до эскулетина и декстрозы; эскулетин реагирует с цитратом железа с образованием тёмно-коричневого или чёрного комплекса, видимого как зона чёрного осадка вокруг колоний.

Стрептококки группы viridans иногда дают слабоположительную реакцию. Виды Leuconostoc, Pediococcus и Lactococcus, вызывающие инфекции у человека, дают положительный результат желчно-эскулинового теста.

Для усиления роста энтерококков в желчно-эскулиновый агар можно добавить 50 мл/л лошадиной сыворотки.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 44,6 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов, ориентировочно 0,10 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Не допускайте перегрева среды.

Посев и инкубация

Исследуемые образцы можно непосредственно штрихом наносить на поверхность чашки.

Инокулированные чашки следует сразу инкубировать в анаэробных условиях при 35–37 °C. Инкубацию проводят до 7 суток.

Перед началом инкубации среду в чашках следует восстановить в анаэробном контейнере в течение 18–24 ч.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или коричневато-жёлтый однородный сыпучий порошок.

Желирование

Плотное, сопоставимое с гелем 1,5 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель янтарного цвета с голубоватым оттенком.

Реакция

Реакция водного раствора концентрацией 4,46 % масс./об. при 25 °C: pH 7,1 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,90–7,30.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после анаэробной инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч. При отсутствии роста инкубацию продолжают до 7 суток.

* Соответствующие номера WDCM.

Ограничения метода

Для полной идентификации необходимо выполнять дополнительные биохимические и серологические тесты.

Положительная желчно-эскулиновая реакция не является достаточным основанием для окончательной идентификации энтерококков: следует использовать дополнительные тесты, включая определение устойчивости к соли.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила микробиологической лабораторной практики.
• При обращении с образцами соблюдайте стандарт