Основа среды для культирования лептоспир HiMedia M1009-500G (уп/500 гр)

Основа среды для культирования лептоспир HiMedia M1009-500G (уп/500 гр) представляет собой химически определенную сухую питательную среду для выделения и поддержания видов Leptospira. Применяется для анализа клинических образцов мочи, тканей почек и печени, а также проб воды; имеет сертификат ФСЗ 2009/03706.

Принцип измерения

Лептоспироз — острое лихорадочное заболевание, вызываемое бактериями рода Leptospira. Прямое культивирование крови является наиболее надежным методом обнаружения возбудителя в первую неделю болезни; в дальнейшем и в течение нескольких месяцев лептоспиры могут быть выделены из неразбавленных образцов мочи, а при вскрытии — из тканей почек, печени, крови и мочи.

Основа среды M1009 была разработана Эллингхаузеном и Маккаллохом, позже модифицирована Джонсоном и Харрисом. Для полноценного роста среда обогащается добавкой MV Enrichment Supplement (FD066), которая обеспечивает организм длинноцепочечными жирными кислотами в качестве источника углерода и энергии, а также необходимыми витаминами. Соли в составе среды обеспечивают питательную поддержку, фосфаты создают буферную систему, а хлорид натрия поддерживает осмотический баланс. Лептоспиры метаболизируют жирные кислоты путем бета-окисления, конечными продуктами которого являются ацетат и углекислый газ (CO₂).

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Растворите 2,56 г порошка основы в 900 мл очищенной или дистиллированной воды. Перемешайте до полного растворения.
2. Стерилизуйте среду в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
3. Охладите среду до 45–50 °C.
4. В асептических условиях добавьте 100 мл стерильной добавки MV Enrichment Supplement (FD066).
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные пробирки или флаконы.

Инкубация и интерпретация результатов

1. Инкубируйте культуры при комнатной температуре в темноте до 6 недель.
2. Рост микроорганизмов происходит ниже поверхности среды.
3. Еженедельно проверяйте материал, отобранный на несколько сантиметров ниже поверхности бульона, с помощью прямого «мокрого» препарата под темнопольным микроскопом. Лептоспиры характеризуются специфической «штопореобразной» подвижностью.
4. Осматривайте пробирки каждые 5–7 дней. Рост проявляется в виде кольцевой зоны (диска) на глубине 1–3 см от поверхности среды.
5. Отсутствие кольцевой зоны не всегда означает отсутствие лептоспир.
6. Для микроскопического исследования возьмите небольшое количество материала из зоны диска. Окрашивание по Грамму не является удовлетворительным; рекомендуется фиксация микроколоний метанолом и окрашивание по Гимзе для визуализации палочковидных форм.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Общие параметры

• Тип среды: химически определенная
• Физическая форма: порошок (от белого до кремового, однородный, свободнотекучий)
• Значение pH (при 25 °C): 7,5 $\pm$ 0,2 (диапазон 7,30–7,70)
• Вид готовой среды: бесцветный прозрачный раствор (базовая среда); светло-желтый прозрачный раствор (после добавления FD066)
• Материал упаковки: ПНД (HDPE)

Культуральные характеристики

Характеристики определены при использовании стерильной добавки MV Enrichment Supplement (FD066) после инкубации при 29–30 °C до 7 суток.

Область применения и ограничения

Типы образцов

• Клинические образцы: моча.
• Пробы воды.

Ограничения

• Требования к росту могут варьироваться в зависимости от индивидуальных особенностей штаммов.
• Каждая партия среды протестирована на микроорганизмы, указанные в сертификате анализа (COA). При необходимости использования для специфических микроорганизмов, не указанных в COA, рекомендуется провести собственную валидацию среды.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение сухой среды: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом месте, защищенном от перепадов температур и источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание комкования.

Меры предосторожности и утилизация

• Использование: только для профессионального использования в диагностике in vitro.
• Средства защиты: при работе использовать защитные перчатки, одежду, средства защиты глаз и лица.
• Утилизация: все загрязненные материалы и использованные среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией в соответствии с лабораторными протоколами по обращению с инфекционными материалами.