Основа среды для культирования лептоспир HiMedia M1009-500G (уп/500 гр)

Основа среды для культивирования лептоспир HiMedia M1009-500G (уп/500 гр) — химически определённая порошкообразная основа питательной среды для микробиологических исследований. Применяется для культивирования и поддержания видов Leptospira; перед использованием к основе добавляют 100 мл стерильной обогащающей добавки MV Enrichment Supplement (FD066).

Назначение

Основа среды рекомендована для культивирования и поддержания видов Leptospira. Типы исследуемых образцов:

• клинические образцы — моча;
• образцы воды.

Продукт предназначен для применения in vitro и только квалифицированным персоналом.

Состав

Состав среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия установленным рабочим параметрам.

Технические характеристики

• Фасовка: 500 г
• Сертификат: ФСЗ 2009/03706
• Назначение изделия: основа
• Конечный pH при 25 °C: 7,5 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,30–7,70

Приготовление среды

1. Приостановите 2,56 г порошка в 900 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Перемешайте до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (ориентировочно ≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 100 мл стерильной обогащающей добавки MV Enrichment Supplement (FD066).
6. Тщательно перемешайте.
7. Асептически разлейте среду в стерильные пробирки или флаконы необходимого типа.

Принцип действия и интерпретация результатов

Лептоспироз — острое лихорадочное заболевание, вызываемое представителями рода Leptospira. Прямое культивирование крови является наиболее надёжным способом обнаружения Leptospira в течение первой недели заболевания. После первой недели заболевания и в течение нескольких последующих месяцев лептоспиры могут выделяться методом прямого культивирования неразбавленных образцов мочи. При патологоанатомическом исследовании лептоспиры могут быть выделены из тканей почек и печени, а также из крови и мочи.

Основа среды для лептоспир первоначально разработана Эллингхаузеном и Мак-Каллохом и модифицирована Джонсоном и Харрисом. Среда обогащается добавлением обогащающей добавки для Leptospira.

Обогащающая добавка для Leptospira обеспечивает длинноцепочечные жирные кислоты, служащие источником углерода и энергии, а также витамином для роста Leptospira. Соли поставляют микроорганизмам необходимые питательные вещества. Фосфаты образуют буферную систему, а хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие и поставляет необходимые ионы. Leptospira метаболизирует жирные кислоты посредством β-окисления; образующиеся конечные продукты метаболизма — ацетат и диоксид углерода.

Инкубация и выявление роста

Все посевы инкубируют в темноте при комнатной температуре не более 6 недель. Микроорганизмы растут ниже поверхности среды.

Материал, отобранный на расстоянии нескольких сантиметров ниже поверхности бульонной культуры, следует еженедельно исследовать на наличие роста методом прямого влажного препарата в условиях темнопольного освещения. Лептоспиры демонстрируют характерную подвижность, напоминающую движение штопора.

Пробирки на наличие роста исследуют каждые 5–7 дней. Рост проявляется в виде кольцевой зоны, или диска, расположенной на 1–3 см ниже поверхности среды. Отсутствие кольцевой зоны роста не обязательно означает отсутствие лептоспир.

Небольшое количество материала из области диска отбирают и исследуют микроскопически. Окраска по Граму для этой цели неудовлетворительна. Микроколонии можно фиксировать метанолом и окрашивать по Гимзе для выявления палочковидных форм.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для образцов воды применяют соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим руководствам и местным нормативным требованиям. Для клинических образцов применяют соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы перед утилизацией необходимо стерилизовать автоклавированием.

Контроль качества

Внешний вид

Белый или кремовый однородный сыпучий порошок.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: бесцветный прозрачный раствор.
• Среда после добавления FD066: прозрачный раствор светло-жёлтого цвета в пробирках.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 0,256 % м/о при 25 °C.

• pH: 7,5 ± 0,2

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления стерильной обогащающей добавки MV Enrichment Supplement (FD066) и инкубации при 29–30 °C в течение не более 7 суток.

Ограничения применения

• Разные микроорганизмы имеют индивидуальные требования к условиям роста и могут демонстрировать различный характер роста на среде.
• Каждая серия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA).
• При использовании среды для конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, рекомендуется предварительно валидировать среду с учётом специфических требований пользователя.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения неоткрытого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения: в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом состоянии.
• Порошок обладает гигроскопичностью; попадание влаги может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования контейнер необходимо плотно закрывать.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в пределах установленного срока годности и при соблюдении рекомендованных условий хранения.

Меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе использовать защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдать правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдать стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов необходимо соблюдать установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими методами лабораторной работы.