HiMedia M1009-100G Основа среды для лептоспир

Основа питательной среды HiMedia M1009-100G Основа среды для лептоспир — химически определённая порошкообразная среда с конечным pH 7,5 ± 0,2. Предназначена для культивирования и поддержания видов Leptospira из клинических образцов мочи и проб воды; готовую среду хранят при 2–8 °C.

Назначение

Среда рекомендована для культивирования и поддержания видов Leptospira. Тип образцов:

• клинические образцы — моча;
• пробы воды.

Состав

Состав на 1 л среды:

Конечный pH при 25 °C: 7,5 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Приготовление среды

1. Взвесьте 2,56 г порошка и суспендируйте в 900 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Перемешайте до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,10 МПа; ≈1,03 бар) при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 100 мл стерильной добавки для обогащения среды для Leptospira MV Enrichment Supplement (FD066).
6. Тщательно перемешайте.
7. Асептически разлейте среду в стерильные пробирки или флаконы в необходимом объёме.

Принцип и интерпретация

Лептоспироз — острое лихорадочное заболевание, вызываемое представителями рода Leptospira. Прямое культивирование крови является наиболее надёжным способом обнаружения Leptospira в течение первой недели заболевания. После первой недели заболевания и в течение нескольких последующих месяцев лептоспиры могут быть выделены прямым культивированием неразбавленных образцов мочи. При вскрытии лептоспиры могут быть выделены из тканей почек и печени, а также из крови и мочи.

Основа среды для лептоспир первоначально разработана Ellinghausen и McCullough, затем модифицирована Johnson и Harris. Среда обогащается добавлением обогащающей добавки для Leptospira.

Добавка для обогащения Leptospira обеспечивает длинноцепочечные жирные кислоты, являющиеся источником углерода и энергии, а также витамины, необходимые для роста Leptospira. Соли поставляют необходимые для роста микроорганизмов питательные вещества. Фосфаты образуют буферную систему, а хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие и обеспечивает микроорганизмы необходимыми ионами. Leptospira метаболизирует жирные кислоты путём β-окисления; образующиеся конечные продукты метаболизма — ацетат и диоксид углерода.

Все культуры инкубируют в темноте при комнатной температуре в течение периода до 6 недель. Микроорганизмы растут ниже поверхности среды. Материал, отобранный на глубине нескольких сантиметров ниже поверхности бульонной культуры, следует еженедельно исследовать на наличие роста методом прямого влажного препарата в тёмном поле. Лептоспиры имеют характерную штопорообразную подвижность.

Пробирки на наличие роста осматривают каждые 5–7 дней. Рост проявляется в виде кольцевой зоны, или диска, расположенного на 1–3 см ниже поверхности среды. Отсутствие кольцевой зоны роста не обязательно означает отсутствие лептоспир. Небольшое количество материала из области диска извлекают и исследуют микроскопически; окраска по Граму для этой цели неудовлетворительна. Микроколонии можно фиксировать метанолом и окрашивать по Гимзе для выявления палочковидных форм.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после добавления стерильной добавки для обогащения среды MV Enrichment Supplement (FD066) и инкубации при 29–30 °C в течение периода до 7 суток.

Технические характеристики

• Назначение изделия: основа среды
• Масса: 100 г
• Конечный pH при 25 °C: 7,5 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,30–7,70
• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от белого до кремового цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: бесцветный прозрачный раствор.
• После добавления FD066: прозрачный раствор светло-жёлтого цвета в пробирках.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 0,256 % масса/объём при 25 °C: pH 7,5 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,30–7,70.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для проб воды применяйте надлежащие методы отбора и обработки образцов в соответствии с руководствами и местными нормативными требованиями. Для клинических образцов применяйте установленные методы обращения с образцами в соответствии с действующими руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Условия инкубации и выявление роста

• Температура инкубации: комнатная температура для общей процедуры культивирования.
• Освещение: темнота.
• Продолжительность инкубации: до 6 недель.
• Периодичность осмотра пробирок: каждые 5–7 дней.
• Расположение зоны роста: кольцевая зона на 1–3 см ниже поверхности среды.
• Метод подтверждения роста: прямой влажный препарат с исследованием в тёмном поле.
• Характерная подвижность: штопорообразная.
• Окраска по Граму: неудовлетворительна для выявления лептоспир.
• Дополнительная окраска: фиксация микроколоний метанолом и окрашивание по Гимзе для выявления палочковидных форм.

Ограничения применения

• Отдельные микроорганизмы различаются по требованиям к условиям роста и могут демонстрировать на среде различные характеристики роста.
• Каждая партия среды проверена на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа.
• При использовании среды для конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, пользователю рекомендуется предварительно валидировать среду с учётом специфических требований к применению.

Ожидаемые рабочие характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованных условиях.

Предупреждения и меры предосторожности

• Изделие предназначено для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Указания по