HiMedia M1009-100G Основа среды для лептоспир

Основа питательной среды HiMedia M1009-100G для лептоспир, предназначенная для культивирования и поддержания видов Leptospira. Среда представляет собой химически определенный порошок, требующий дополнения обогатительной добавкой для полноценного роста микроорганизмов.

Принцип измерения и интерпретация

Лептоспироз — острое лихорадочное заболевание, вызываемое бактериями рода Leptospira. Прямое культивирование крови является наиболее надежным способом обнаружения лептоспир в первую неделю болезни. В дальнейшем (в течение нескольких месяцев) возбудители могут быть выделены из неразбавленных образцов мочи, а при вскрытии — из тканей почек, печени, крови и мочи.

Основа среды Leptospira Medium Base была разработана по методу Эллингхаузена и Маккаллоха с модификациями Джонсона и Харриса. Для обеспечения роста среды дополняют обогатительной добавкой Leptospira Enrichment, которая предоставляет длинноцепочечные жирные кислоты в качестве источника углерода и энергии, а также необходимые витамины. Соли обеспечивают питательную базу, фосфаты создают буферную систему, а хлорид натрия поддерживает осмотический баланс. Лептоспиры метаболизируют жирные кислоты путем бета-окисления, в результате чего образуются ацетат и углекислый газ (CO₂).

Особенности роста и анализа

Все культуры инкубируют при комнатной температуре в темноте до 6 недель. Организмы растут ниже поверхности среды.

1. Раз в 5–7 дней следует проверять пробирки на наличие роста.
2. Рост проявляется в виде кольцевой зоны (диска) на глубине 1–3 см от поверхности среды.
3. Отсутствие видимой кольцевой зоны не всегда означает отсутствие лептоспир.
4. Для анализа необходимо отобрать небольшое количество материала из зоны диска и исследовать микроскопически.
5. Окраска по Граму не является удовлетворительной. Для визуализации палочковидных форм микроколонии фиксируют метанолом и окрашивают по Гимзе.
6. При исследовании в темном поле лептоспиры демонстрируют характерную «штопорообразную» подвижность.

Методика приготовления и использования

Приготовление среды

1. Суспендируйте 2,56 г основы в 900 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Перемешайте до полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 100 мл стерильной обогатительной добавки MV Enrichment Supplement (FD066).
6. Тщательно перемешайте и асептически разлейте по стерильным пробиркам или флаконам.

Типы образцов

• Клинические образцы: моча.
• Пробы воды.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,5 ± 0,2

Общие параметры

• Внешний вид: белый или кремовый однородный свободнотекущий порошок.
• Цвет и прозрачность готовой среды:
  • Базовая среда: бесцветный прозрачный раствор.
  • После добавления FD066: светло-желтый прозрачный раствор.
• Диапазон pH: 7,30–7,70.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при использовании стерильной добавки MV Enrichment Supplement (FD066) после инкубации при 29–30 °C до 7 суток.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение сухой основы: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать для предотвращения комкования. Хранить в сухом проветриваемом месте, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Ограничения и меры предосторожности

• Среда предназначена только для профессионального использования в целях диагностики in vitro.
• Индивидуальные организмы могут иметь различные требования к росту и демонстрировать вариативность развития на данной среде.
• Рекомендуется проводить валидацию среды для конкретных микроорганизмов, не указанных в сертификате анализа (COA), исходя из уникальных требований пользователя.
• Работа с клиническими образцами должна проводиться в соответствии с установленными правилами микробиологической безопасности.
• Загрязненные материалы перед утилизацией должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации.