HiMedia M1005F-500G Основа агара S.F.P.

Микробиологическая питательная среда HiMedia M1005F-500G Основа агара S.F.P. предназначена для приготовления селективной среды с добавлением яичной эмульсии и обогащающей добавки. Основа используется для предполагаемой идентификации и количественного определения Clostridium perfringens в пищевых продуктах; для анализа требуется анаэробная инкубация и последующее подтверждение подозрительных колоний.

Назначение и область применения

Основа агара S.F.P. с добавлением селективной добавки и обогащающей добавки используется для предполагаемой идентификации и количественного определения Clostridium perfringens в пищевых продуктах в соответствии с процедурой FDA BAM, 1998.

Среда предназначена для микробиологического контроля пищевых продуктов, включая приготовленное мясо и продукты из мяса птицы, которые могут быть источниками инфекции, вызванной C. perfringens. Подсчёт микроорганизмов в образцах пищевых продуктов применяется при эпидемиологическом расследовании вспышек пищевых отравлений.

Состав

Состав на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Конечный pH при 25 °C: 7,6 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация результатов

Clostridium — крупный род грамположительных спорообразующих анаэробных бактерий. Пищевое отравление, вызванное Clostridium perfringens, относится к распространённым типам пищевых заболеваний.

Споры этого вида обычно устойчивы к нагреванию и прорастают с последующим ростом во время приготовления пищи. Основной симптом отравления C. perfringens — диарея; основным этиологическим фактором является термолабильный энтеротоксин, вырабатываемый спорулирующими клетками.

Среда S.F.P. Agar Base вместе с эмульсией яичного желтка и D-циклосерином, выполняющим функцию селективного агента, обеспечивает высокую селективность в отношении C. perfringens. Триптоза, соевый пептон и дрожжевой экстракт поставляют азотсодержащие соединения, углерод и серу. Восстановление сульфита C. perfringens проявляется образованием чёрных колоний. D-циклосерин (FD014) подавляет конкурентную микрофлору и способствует восстановлению C. perfringens.

Колонии C. perfringens на среде с яичным желтком имеют чёрный цвет и окружены непрозрачной белой зоной размером 2–4 мм, возникающей вследствие лецитиназной активности.

Лецитиназа-положительные факультативные анаэробы могут расти на среде S.F.P. Agar и делать чашки полностью непрозрачными, маскируя реакцию яичного желтка у C. perfringens. Чёрные колонии могут образовывать и микроорганизмы, отличные от C. perfringens. Поэтому предполагаемые колонии C. perfringens необходимо дополнительно подтверждать тестами на подвижность, восстановление нитрата и разжижение желатина.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 23,5 г сухой основы в 460 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 50 °C.
5. Добавьте 40 мл эмульсии яичного желтка FD045F и восстановленное содержимое одного флакона добавки S.F.P. T.S.C. FD014.
6. Тщательно перемешайте перед разливом в стерильные чашки Петри.

Методика подготовки образцов и посева

1. В асептических условиях смешайте 25 г образца с 225 мл разбавляющей жидкости с пептоном для получения однородной суспензии в соотношении 1:10.
2. Приготовьте соответствующие разведения до 10⁻⁶, используя разбавляющую жидкость с пептоном.
3. Налейте слой основы агара S.F.P. без яичного желтка объёмом 6–7 мл в чашки Петри размером 100 × 15 мм.
4. Перенесите по 1 мл каждого разведения суспензии в центр двух параллельных чашек с агаром.
5. Добавьте ещё 15 мл основы агара S.F.P. без яичного желтка или основы агара S.F.P. с 50 % эмульсии яичного желтка.
6. Перемешайте среду с инокулятом осторожным вращением чашки.
7. В качестве альтернативы для пищевых продуктов, содержащих другие типы сульфатвосстанавливающих микроорганизмов, нанесите по 0,1 мл каждого разведения на поверхность залитых чашек с трифенилтетразолий-сульфитным агаром с эмульсией яичного желтка (TSC).
8. После впитывания инокулята, приблизительно через 5 мин, залейте чашки слоем объёмом 10 мл агара TSC без эмульсии яичного желтка.
9. Дайте среде затвердеть и инкубируйте чашки в анаэробных условиях в соответствии с протоколом BAM.
10. Подсчитайте чашки, содержащие 20–200 чёрных колоний.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 2,0 % агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: базовая среда образует гель янтарного цвета, слегка опалесцирующий; после добавления эмульсии яичного желтка в чашках Петри образуется непрозрачный гель жёлтого цвета.
• Реакция среды: для определения реакции 4,7 г среды растворяют в 95 мл дистиллированной воды и измеряют при 25 °C.
• pH: 7,40–7,80.
• Реакция среды при 25 °C: pH 7,6 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 40–48 ч в анаэробных условиях с добавлением эмульсии яичного желтка FD045 и добавки S.F.P. FD013.

Технические характеристики

• Артикул: M1005F-500G.
• Назначение изделия: основа питательной среды.
• Физическая форма: порошок.
• Происхождение: животное.
• Тип продукта: стандартный.
• Тип упаковки: ПЭВП (HDPE).
• Масса: 500 г.
• Конечный pH при 25 °C: 7,6 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,40–7,80.
• Температура: 10–30 °C.

Хранение и срок годности

Храните сухую среду в плотно закрытом контейнере при