Основа агара S.F.P. для C.perfringens HiMedia M1005-500G (уп/500 гр)

Питательная среда — основа агара S.F.P. для C.perfringens HiMedia M1005-500G (уп/500 гр) с конечным pH 7,6 ± 0,2. Основа агара применяется с селективной добавкой и обогащением для предварительной идентификации и количественного определения Clostridium perfringens в пищевых продуктах, при этом для анализа требуются эмульсия яичного желтка и добавка S.F.P.

Назначение

Основа агара S.F.P. с добавлением селективной добавки и обогащения применяется для предварительной идентификации и количественного определения Clostridium perfringens в пищевых продуктах.

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Конечный pH при 25 °C: 7,6 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация результатов

Пищевое отравление, вызываемое Clostridium perfringens, относится к распространённым видам пищевых заболеваний человека. C. perfringens обнаруживается в сыром мясе, мясе птицы, сухих супах и соусах, сырых овощах, а также в других пищевых продуктах и пищевых ингредиентах. При этом случаи пищевых заболеваний обычно связаны с готовыми продуктами из мяса или птицы.

Споры некоторых штаммов, способные сохраняться после нагревания при приготовлении пищи, прорастают и размножаются в продуктах, которые хранились при недостаточном охлаждении. Основной симптом отравления, диарея, вызывается термолабильным энтеротоксином, который образуется только спорулирующими клетками. Пищевые продукты, в которых существуют благоприятные условия для споруляции, могут содержать энтеротоксин.

Пищевое отравление диагностируют с использованием количественных анаэробных посевов исследуемых пищевых продуктов и фекалий. Определение количества микроорганизмов в образцах пищевых продуктов используют при эпидемиологическом расследовании вспышек пищевых заболеваний.

Основа агара Shahidi Ferguson Perfringens (S.F.P.) приготовлена по рецептуре Shahidi и Ferguson. На среде выявляются реакции лецитиназы и восстановления сульфита. Среда в сочетании с эмульсией яичного желтка и добавкой, содержащей канамицин и полимиксин B в качестве селективных агентов, обеспечивает селективность в отношении C. perfringens.

Триптоза, папаиновый гидролизат соевой муки и дрожжевой экстракт обеспечивают микроорганизмы рода Clostridium азотистыми соединениями, углеродом, серой, витаминами группы B и другими необходимыми для роста компонентами. Бисульфит натрия и цитрат аммонийного железа служат индикаторами восстановления сульфита C. perfringens, в результате которого образуются чёрные колонии.

Канамицин и полимиксин B, входящие в добавку FD013, подавляют сопутствующую бактериальную микрофлору и обеспечивают лучшее выделение вегетативных клеток и спор C. perfringens, чем применение одного полимиксина B или сульфадиазина. Некоторые штаммы C. perfringens вследствие лецитиназной активности образуют вокруг колонии непрозрачную зону.

Лецитиназа-положительные факультативные анаэробы также могут расти на агаре S.F.P., делая чашки полностью непрозрачными; это может маскировать реакцию яичного желтка у C. perfringens.

Чёрные колонии могут образовывать микроорганизмы, отличные от C. perfringens. Поэтому предполагаемые колонии C. perfringens необходимо дополнительно подтверждать тестами на подвижность, восстановление нитратов и разжижение желатина.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 23,5 г сухой среды в 475 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении ≈0,103 МПа (15 psi) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 50 °C.
5. Добавьте 25 мл эмульсии яичного желтка FD045 и восстановленное содержимое одного флакона добавки S.F.P. FD013.
6. Тщательно перемешайте перед разливом в стерильные чашки Петри.

Методика выделения и количественного определения

1. Внесите на поверхность среды 0,1 мл десятикратных разведений исследуемого образца, приготовленных в пептонной воде M028.
2. Оставьте поверхность среды открытой на 5–10 мин для подсушивания.
3. Покройте поверхность 10 мл агара без эмульсии яичного желтка и дайте ему затвердеть.
4. Инкубируйте посевы при 37 °C в течение 20–24 ч в анаэробных условиях.
5. Для предварительного подсчёта выберите и подсчитайте крупные чёрные колонии, окружённые непрозрачной зоной.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 2,0%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: базовая среда образует гель янтарного цвета со слабой опалесценцией; после добавления эмульсии яичного желтка в чашках Петри образуется жёлтый непрозрачный гель.
• Реакция среды: 4,7 г среды в 95 мл дистиллированной воды при 25 °C; pH 7,6 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,40–7,80.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 40–48 ч в анаэробных условиях с добавлением эмульсии яичного желтка FD045 и добавки S.F.P. FD013.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Модель/артикул: M1005-500G
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Сертификат: ФСЗ 2009/03709
• Конечный pH при 25 °C: 7,6 ± 0,2
• Фасовка: 500 г

Условия хранения и срок годности

• Хранение сухой среды: при температуре ниже 30 °C в плотно закрытой таре.
• Хранение приготовленной среды: при 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.

Ограничения и подтверждение результатов

Чёрное окрашивание колоний не является специфичным признаком C. perfringens: аналогичные колонии могут формировать другие микроорганизмы. Предварительно