Питательная микробиологическая среда HiMedia M078A-500G Модифицированный железный агар Клиглера предназначена для идентификации микроорганизмов и поставляется в упаковке массой 500 г. Среда используется для идентификации Yersinia enterocolitica и дифференциального определения грамотрицательных кишечных палочек по ферментации декстрозы, лактозы и образованию сероводорода.

Назначение

Модифицированный железный агар Клиглера применяется для дифференциации возбудителей тифа, дизентерии и родственных кишечных палочек. Среда предназначена для работы с чистыми культурами предполагаемых микроорганизмов, выделенными на плотных питательных средах, включая агар МакКонки (M081), висмут-сульфитный агар (M027), дезоксихолат-цитратный агар (M065) и агар SS (M108).

Состав

Расчётное содержание компонентов на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих характеристик среды.

Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 57,41 г сухой среды, что соответствует количеству обезвоженной среды на 1 л, в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин; давление составляет 15 фунтов, ориентировочно ≈0,103 МПа.
5. Охладите пробирки в наклонном положении, чтобы сформировать скошенную часть длиной около 1 дюйма; в пробирке должен остаться столбик среды.

Наилучшие реакции получают на свежеприготовленной среде.

Предупреждение: не допускайте перегрева, поскольку это может привести к образованию осадка в среде.

Принцип действия и интерпретация результатов

Железный агар Клиглера представляет собой комбинацию свинцово-ацетатной среды, описанной Клиглером, и двухсахарного агара Рассела. В качестве индикатора pH вместо ранее применявшегося индикатора Андраде используется феноловый красный.

Среда позволяет:

• дифференцировать ферментирующие лактозу микроорганизмы от неферментирующих;
• отличать Salmonella Typhi от других представителей рода Salmonella;
• дифференцировать Salmonella Paratyphi A от Salmonella Schottmuelleri и Salmonella Enteritidis;
• идентифицировать Yersinia enterocolitica в соответствии с рекомендацией комитета ISO;
• выявлять образование сероводорода и газа.

В состав среды, помимо триптона, пептона HM B и дрожжевого экстракта, входят лактоза и глюкоза (декстроза), что обеспечивает дифференциацию видов кишечных палочек. Феноловый красный является индикатором pH и изменяет окраску в ответ на образование кислоты при ферментации сахаров.

Ферментация декстрозы приводит к образованию кислоты, изменяющей цвет индикатора с красного на жёлтый. Декстроза содержится в небольшом количестве, поэтому образование кислоты ограничено. На поверхности среды происходит повторное окисление индикатора, и скошенная часть сохраняет красную окраску. При ферментации лактозы образуется большее количество кислоты, препятствующее повторному окислению индикатора; в результате вся среда становится жёлтой.

Сочетание сульфата железа и тиосульфата натрия позволяет выявлять образование сероводорода. Сероводород определяется по чёрной окраске, возникающей по всему столбику среды или в виде кольца в верхней части столбика.

Неферментирующие лактозу микроорганизмы, например Salmonella и Shigella, первоначально вызывают пожелтение скошенной части вследствие образования кислоты при ферментации небольшого количества глюкозы (декстрозы). После истощения запасов глюкозы в аэробной зоне скошенной части реакция становится щелочной: скошенная часть приобретает красную окраску из-за окисления образовавшихся кислот. В анаэробной зоне столбика среды обратного изменения реакции не происходит, поэтому столбик сохраняет кислую реакцию и жёлтую окраску.

Ферментирующие лактозу микроорганизмы вызывают пожелтение скошенной части и столбика, поскольку ферментация лактозы сопровождается образованием большого количества кислот. Образовавшиеся кислоты поддерживают кислый pH также в аэробных условиях.

Исходная окраска среды в пробирке указывает на отсутствие ферментации как глюкозы (декстрозы), так и лактозы.

Газообразование, или аэрогенная реакция, выявляется по отдельным пузырькам, расслоению среды или смещению агара вследствие образования трещин в столбике.

Типы образцов

Для исследования используют изолированные микроорганизмы, выделенные из:

• клинических образцов;
• пищевых продуктов;
• молочных продуктов;
• воды.

Сбор и обращение с образцами

• Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.
• Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим руководствам.
• Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам и местным нормативным требованиям.
• После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Микробиологический контроль

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.