HiMedia M078-100G Железный агар Клиглера

Питательная дифференциальная среда HiMedia M078-100G «Железный агар Клиглера» производства HiMedia предназначена для идентификации грамотрицательных кишечных бацилл по ферментации глюкозы (декстрозы), лактозы и образованию сероводорода. Железный агар Клиглера применяют для анализа выделенных микроорганизмов из клинических, пищевых, молочных и водных образцов; результаты оценивают через 18–24 ч инкубации, используя чистые изоляты и прямую инокуляционную петлю.

Назначение и идентификация

Железный агар Клиглера — дифференциальная питательная среда для идентификации грамотрицательных кишечных бацилл в клинических и не клинических образцах на основании ферментации глюкозы (декстрозы), лактозы и образования сероводорода.

Состав

Состав рассчитан и стандартизирован для обеспечения заявленных рабочих характеристик.

HM Peptone B эквивалентен мясному экстракту.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 57,52 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте и разлейте среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа; ≈1,03 бар) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки в наклонном положении, чтобы сформировать скошенную часть среды с толщиной столбика около 25,4 мм.

Наиболее характерные реакции получают на свежеприготовленной среде. Не используйте пробирки или флаконы с завинчивающимися крышками.

Предупреждение при приготовлении

Не допускайте перегрева: перегрев может привести к образованию осадка в среде.

Принцип дифференциации и интерпретация

Железный агар Клиглера представляет собой сочетание среды с ацетатом свинца, описанной Клиглером, и двухсахарного агара Рассела. Среда используется для дифференциации тифозных, дизентерийных и родственных бацилл. Феноловый красный применяется в качестве индикатора pH вместо ранее использовавшегося индикатора Андраде.

Среда дифференцирует ферментирующие лактозу микроорганизмы от не ферментирующих лактозу. С помощью среды также проводят различение Salmonella Typhi от других видов Salmonella, а также Salmonella Paratyphi A от Salmonella Schottmuelleri и Salmonella Enteritidis.

Ферментация декстрозы приводит к образованию кислоты, из-за чего индикатор изменяет цвет с красного на жёлтый. Поскольку содержание декстрозы невелико, количество образующейся кислоты ограничено. На поверхности среды происходит повторное окисление индикатора, поэтому индикатор сохраняет красный цвет. При ферментации лактозы образуется большое количество кислоты, препятствующее повторному окислению; в результате вся среда приобретает жёлтый цвет.

Помимо пептона, HM Peptone B и дрожжевого экстракта, железный агар Клиглера содержит лактозу и глюкозу (декстрозу), что позволяет дифференцировать виды кишечных бацилл. Феноловый красный является индикатором pH и изменяет цвет в ответ на образование кислоты при ферментации сахаров.

Сочетание сульфата железа и тиосульфата натрия позволяет выявлять образование сероводорода. Образование сероводорода проявляется почернением всего столбика среды либо появлением чёрного кольца вблизи верхней части столбика.

Не ферментирующие лактозу микроорганизмы, например Salmonella и Shigella, первоначально образуют жёлтую скошенную часть вследствие образования кислоты при ферментации небольшого количества глюкозы (декстрозы). После исчерпания глюкозы в аэробной зоне скошенной части реакция становится щелочной, и скошенная часть окрашивается в красный цвет вследствие окисления образовавшихся кислот. В анаэробной зоне столбика обратного изменения реакции не происходит, поэтому столбик остаётся кислым и жёлтым.

Ферментирующие лактозу микроорганизмы образуют жёлтую скошенную часть и жёлтый столбик вследствие ферментации лактозы. Большое количество образующейся кислоты поддерживает кислый pH даже в аэробных условиях.

Первоначальный цвет среды в пробирке указывает на отсутствие ферментации как глюкозы (декстрозы), так и лактозы. Образование газа, или аэрогенная реакция, выявляют по отдельным пузырькам, расслоению агара либо его смещению вследствие образования трещин в столбике среды.

Методика идентификации

Чистые культуры предполагаемых микроорганизмов, выделенные на плотных питательных средах, например на агаре МакКонки (M081), висмут-сульфитном агаре (M027), дезоксихолат-цитратном агаре (M065), SS-агаре (M108) и других средах, инокулируют на железный агар Клиглера для идентификации.

Тип образца

Изолированные микроорганизмы из следующих типов образцов:

• клинические образцы;
• пищевые образцы;
• молочные образцы;
• водные образцы.

Отбор и обращение с образцами

• Для водных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам и местным нормативным требованиям.
• Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно руководствам.
• Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.
• После использования контаминированные материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Результаты следует регистрировать через 18–24 ч, чтобы избежать ошибочной интерпретации.
2. Для инокуляции следует использовать прямую проволочную петлю.
3. Во избежание ошибочных результатов необходимо использовать чистые изоляты.
4. Для полной идентификации необходимо выполнить дополнительные биохимические и серологические тесты.

Технические характеристики

• Назначение изделия