Диагностическая питательная среда Нитратный агар HiMedia M072-500G (уп/500 гр) с содержанием нитрата калия 1,000 г/л предназначена для определения восстановления нитратов бактериями. Среда применяется для идентификации и дифференциации микроорганизмов, особенно представителей семейства Enterobacteriaceae, при конечном pH 6,8 ± 0,2.

Назначение

Нитратный агар рекомендуется для выявления способности бактерий восстанавливать нитраты. Тип исследуемого материала — выделенные микроорганизмы из клинических и нестерильных образцов.

Нитратредукция не является подтверждающим тестом. Полная идентификация бактерий должна включать оценку морфологии, реакции по Граму, биохимические и серологические тесты.

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик. Компонент HM peptone B эквивалентен мясному экстракту.

Принцип измерения и интерпретация

Нитратный агар приготовлен в соответствии с формулой, опубликованной в работе Society of American Bacteriologist «Pure Culture Study of Bacteria».

Нитрат калия в составе среды служит субстратом для определения восстановления нитратов бактериями. Некоторые бактерии преобразуют нитраты в нитриты, аммиак или газообразный азот. Невызывающие ферментацию и другие грамотрицательные палочки различаются по способности восстанавливать нитраты. Некоторые представители этой группы способны к денитрификации — восстановлению нитратов до газообразного азота.

Для грамотрицательных палочек, ферментирующих глюкозу, образование газообразного азота из нитратов является важным дифференциальным признаком. Представители Enterobacteriaceae обычно восстанавливают нитраты до нитритов. Нитриты реагируют с сульфаниловой кислотой и N,N-диметил-1-нафтиламином с образованием красного окрашивания; реакция известна как реакция Грисса.

Для выявления нитритов в исследуемую пробу добавляют по 0,5 мл раствора сульфаниловой кислоты (R015) и раствора α-нафтиламина (R009). Образование красно-фиолетового окрашивания обусловлено формированием красного диазокрасителя — p-сульфобензол-азо-α-нафтиламина — и указывает на восстановление нитрата до нитрита.

Если окрашивание не развивается, это означает, что нитрат либо не был восстановлен, либо подвергся дальнейшему восстановлению до аммиака или газообразного азота. Для проверки в пробирку добавляют небольшое количество цинковой пыли. Цинк восстанавливает оставшийся нитрат до нитрита, что приводит к появлению красного окрашивания:

• появление красного окрашивания после добавления цинковой пыли указывает, что нитрат сохранился в среде и ранее не был восстановлен;
• отсутствие красного окрашивания после добавления цинковой пыли указывает на отсутствие нитрата, то есть на его дальнейшее восстановление до соединений, расположенных ниже нитрита в цепи восстановления.

Таким образом, восстановление нитратов подтверждается либо наличием конечного катаболического продукта, либо отсутствием нитрата в среде.

Если микроорганизм быстро растёт и активно восстанавливает нитраты, тест следует проводить после раннего периода инкубации, поскольку нитрит может быть восстановлен далее до азота.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 21,0 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки в наклонном положении для формирования скошенной поверхности среды.

Методика определения нитратредуктазы

1. Используйте пробирку со средой, содержащую исследуемую культуру.
2. Добавьте в пробирку несколько капель раствора сульфаниловой кислоты (R015).
3. Добавьте несколько капель раствора α-нафтиламина (R009).
4. Оцените окрашивание среды: отчётливое красное или розовое окрашивание указывает на восстановление нитрата.
5. Параллельно исследуйте контрольную незасеянную пробирку.
6. Если розовое окрашивание не появилось, добавьте небольшое количество цинковой пыли для подтверждения отсутствия нитрата в среде.
7. Интерпретируйте результат с учётом реакции после добавления цинковой пыли: появление красного цвета указывает на наличие невосстановленного нитрата, отсутствие красного цвета — на дальнейшее восстановление нитрата до нитрита или других продуктов.

При использовании α-нафтиламина окрашивание положительной реакции может быстро бледнеть. Добавление избыточного количества цинка может привести к ложноотрицательной реакции.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для образцов выделенных микроорганизмов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным лабораторным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры безопасности

• Только для применения in vitro.
• Только для профессионального использования.
• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Модель/артикул: M072-500G
• Форма выпуска: порошок
• Тип питательной среды: диагностическая
• Назначение изделия: агар
• Происхождение компонентов: животное
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Масса упаковки: 500 г
• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,60–7,00
• Раствор для определения реакции: 2,1 % масс./об. водный раствор при 25 °C
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,2 % агаровым гелем

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенной среды образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч. Восстановление нитратов определяют после добавления 0,5 мл сульфаниловой кислоты (R015) и 0,5 мл раствора α-нафтиламина (R009).

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее вид обозначался как Enterobacter aerogenes.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения сухого продукта: плотно закрытый контейнер.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде в плотно закрытом флаконе для предотвращения комкования из-за гигроскопичности.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывайте контейнер.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение указанного срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Эксплуатационные ограничения

Раб