Нитратный агар HiMedia M072-500G (уп/500 гр)

Диагностическая питательная среда Нитратный агар HiMedia M072-500G (уп/500 г) производства HiMedia для определения нитратредуктазы у бактерий. Применяется для дифференциации и идентификации различных типов бактерий, в особенности семейства Enterobacteriaceae; имеет сертификат ФСЗ 2009/03705.

Принцип измерения

Нитратный агар разработан в соответствии с формулой Общества американских бактериологов. Способность бактерий восстанавливать нитраты является важным признаком для идентификации микроорганизмов, особенно представителей семейства Enterobacteriaceae.

Нитрат калия в составе среды служит субстратом. Некоторые бактерии восстанавливают нитрат до нитрита, аммиака или газообразного азота. Присутствие нитритов определяется путем добавления сульфаниловой кислоты и раствора $\alpha$-нафтиламина (реакция Гриесса). Образование красно-фиолетового окрашивания (за счет формирования красного диазониевого красителя п-сульфензобензол-азо-$\alpha$-нафтиламина) указывает на восстановление нитрата до нитрита.

Если окрашивание отсутствует, это означает, что нитрат либо не восстанавливался, либо был восстановлен далее до аммиака или азота. Для проверки добавляют щепотку цинковой пыли: цинк восстанавливает остаточный нитрат до нитрита, что вызывает появление красного цвета. Отсутствие красного цвета после добавления цинка подтверждает полное восстановление нитрата.

Методика проведения анализа

1. В пробирку с культурой исследуемого микроорганизма добавьте по несколько капель сульфаниловой кислоты (R015) и раствора $\alpha$-нафтиламина (R009).
2. Появление отчетливого красного или розового цвета указывает на восстановление нитрата.
3. В случае отсутствия розового окрашивания добавьте щепотку цинковой пыли для подтверждения полного отсутствия нитрата в среде.
4. Обязательно проведите аналогичный тест с контрольной (непосеянной) пробиркой.

Примечание: Тест на восстановление нитратов не является подтверждающим; полная идентификация должна включать морфологический, окраску по Грамму, биохимический и серологический анализы.

Приготовление и стерилизация

1. Растворите 21,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте по пробиркам и стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx 0,1$ МПа) в течение 15 минут.
4. Охладите пробирки в наклонном положении для формирования скоса.

Технические характеристики

Состав, г/л:

• Конечный pH (при 25 °C): 6,8 $\pm$ 0,2
• Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от кремового до желтого цвета
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,2 % агаром
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель (скос)
• Диапазон pH: 6,60–7,00

Дополнительные параметры:

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч. Восстановление нитратов определяется после добавления 0,5 мл сульфаниловой кислоты (R015) и 0,5 мл раствора $\alpha$-нафтиламина (R009).

Область применения и ограничения

Среда предназначена для работы с изолированными микроорганизмами из клинических и неклинических образцов.

Ограничения:

• Избыток цинковой пыли может привести к ложноотрицательному результату.
• При использовании $\alpha$-нафтиламина цвет положительной реакции может быстро блекнуть.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом проветриваемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты подлежат обязательному автоклавированию или сжиганию. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, должны быть деконтаминированы в соответствии с лабораторными протоколами.