HiMedia M072-100G Нитратный агар

Сухая питательная среда HiMedia M072-100G Нитратный агар для определения способности бактерий восстанавливать нитраты. Применяется для дифференциации и идентификации различных типов бактерий, в особенности семейства Enterobacteriaceae; вес упаковки 100 г.

Принцип измерения и интерпретация

Нитратный агар разработан в соответствии с формулой Общества американских бактериологов. Нитрат калия в составе среды служит субстратом для определения способности бактерий восстанавливать нитраты. Некоторые микроорганизмы превращают нитрат в нитрит, аммиак или газообразный азот.

Определение нитритов (реакция Грисса)

Присутствие нитритов обнаруживается путем добавления по 0,5 мл сульфаниловой кислоты (R015) и раствора альфа-нафтиламина (R009). Образование красно-фиолетового цвета (за счет формирования красного диазониевого красителя p-сульфензобензол-азо-α-нафтиламина) указывает на восстановление нитрата до нитрита.

Подтверждение полного восстановления

Если окрашивание отсутствует, это означает, что нитрат либо не восстанавливался, либо был восстановлен далее до аммиака или азота. Для проверки добавляют щепотку цинковой пыли:

• Появление красного цвета: цинк восстановил остаточный нитрат до нитрита $\rightarrow$ нитрат присутствовал, полное восстановление не произошло.
• Отсутствие красного цвета: нитрат в среде отсутствует $\rightarrow$ произошло полное восстановление нитрата за пределы стадии нитрита.

Методика проведения анализа

1. Приготовление среды: суспендируйте 21,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Растворение: нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизация: разлейте по пробиркам и стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$ 0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Застывание: дайте пробиркам остыть в наклонном положении (формирование скоса).
5. Посев: инокулируйте среду изолированными микроорганизмами из клинических или неклинических образцов.
6. Инкубация: выдержите при температуре 35–37 °C в течение 18–24 часов.
7. Тестирование:
   • Добавьте в пробирку с культурой по несколько капель сульфаниловой кислоты (R015) и раствора $\alpha$-нафтиламина (R009).
   • Отчетливый красный или розовый цвет указывает на восстановление нитрата.
   • Проведите аналогичный тест с контрольной (неинокулированной) пробиркой.
   • При отсутствии розового цвета добавьте щепотку цинковой пыли для подтверждения отсутствия нитрата.

Технические характеристики

Состав, г/л:

• Конечный pH (при 25 °C): 6,8 $\pm$ 0,2
• Внешний вид: от кремового до желтого однородного свободнотекущего порошка
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,2 % агаром
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель (в виде скоса)
• Диапазон pH: 6,60–7,00

Дополнительные параметры:

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов. Восстановление нитратов определяется после добавления 0,5 мл сульфаниловой кислоты (R015) и 0,5 мл раствора $\alpha$-нафтиламина (R009).

Область применения и ограничения

Среда используется для анализа изолированных микроорганизмов из клинических и неклинических проб.

Ограничения

• Тест на восстановление нитратов не является подтверждающим. Полная идентификация бактерий должна включать морфологический анализ, определение реакции по Граму, а также биохимические и серологические тесты.
• Добавление избытка цинка может привести к ложноотрицательной реакции.
• При использовании $\alpha$-нафтиламина цвет положительной реакции может быстро блекнуть.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом месте, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать флакон во избежание комкования.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Утилизация: использованные или непригодные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации в соответствии с лабораторными правилами работы с инфекционными материалами.