Питательная микробиологическая среда HiMedia M072-100G Нитратный агар представляет собой сухой порошок для выявления восстановления нитратов бактериями. Нитратный агар применяют для дифференциации и идентификации микроорганизмов по способности восстанавливать нитраты, однако результат анализа не является подтверждающим и требует дополнительных морфологических, биохимических и серологических исследований.

Назначение

Нитратный агар рекомендован для выявления восстановления нитратов бактериями. Метод особенно применим для дифференциации и идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae; способность к восстановлению нитратов у нефементирующих и других грамотрицательных палочек может различаться.

Тип образца: выделенные микроорганизмы из клинических и неклинических образцов.

Состав

Состав, г/л:

— эквивалент мясного экстракта.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2.

Принцип измерения и интерпретация

Нитратный агар приготовлен в соответствии с формулой, опубликованной Обществом американских бактериологов в издании «Исследование чистых культур бактерий». Нитрат калия в составе среды служит субстратом для определения восстановления нитратов бактериями.

Некоторые бактерии преобразуют нитраты в нитриты, аммиак или газообразный азот. Способность отдельных микроорганизмов к денитрификации заключается в восстановлении нитратов до газообразного азота. Для грамотрицательных палочек, ферментирующих глюкозу, образование газообразного азота из нитрата является важным дифференциальным признаком.

Присутствие нитритов выявляют добавлением по 0,5 мл раствора сульфаниловой кислоты R015 и раствора α-нафтиламина R009. Образование красно-фиолетовой окраски обусловлено формированием красного диазокрасителя — p-сульфобензол-азо-α-нафтиламина — и указывает на восстановление нитрата до нитрита.

Если окраска не появляется, возможны два варианта:

• нитрат не был восстановлен;
• восстановление прошло дальше стадии нитрита — до аммиака или газообразного азота.

Для проверки в пробирку добавляют щепотку цинковой пыли. Цинк восстанавливает нитрат до нитрита, что приводит к появлению красной окраски. Красная окраска после добавления цинка означает, что нитрат сохранился в среде и ранее не восстанавливался. Отсутствие красной окраски после добавления цинковой пыли указывает на отсутствие нитрата, который был восстановлен до продуктов, находящихся дальше стадии нитрита.

Таким образом, восстановление нитратов подтверждается либо присутствием конечного катаболического продукта, либо отсутствием нитрата в среде.

Представители Enterobacteriaceae обычно восстанавливают нитрат до нитрита. Нитрит реагирует с сульфаниловой кислотой и N,N-диметил-1-нафтиламином с образованием красной окраски; реакция называется реакцией Грисса. Если микроорганизм быстро растёт и активно восстанавливает нитрат, тест следует выполнять после раннего периода инкубации, поскольку нитрит может быть восстановлен далее до азота.

Методика проведения анализа

1. Подготовьте пробирку с культурой, подлежащей исследованию.
2. Добавьте в пробирку несколько капель раствора сульфаниловой кислоты R015.
3. Добавьте несколько капель раствора α-нафтиламина R009.
4. Появление отчётливой красной или розовой окраски указывает на восстановление нитрата.
5. Одновременно исследуйте контрольную неинокулированную пробирку.
6. Если розовая окраска не образуется, добавьте щепотку цинковой пыли для подтверждения отсутствия нитрата в среде.
7. Интерпретируйте результат с учётом того, что отсутствие окраски до добавления цинка может означать как отсутствие восстановления нитрата, так и его дальнейшее восстановление до аммиака или газообразного азота.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 21,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки в наклонном положении для формирования скошенной поверхности среды.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Однородный свободно текущий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,2 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенного агара образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция среды

Реакция 2,1 % водного раствора при 25 °C: pH 6,8 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч. Восстановление нитрата выявляют после добавления 0,5 мл раствора сульфаниловой кислоты R015 и 0,5 мл раствора α-нафтиламина R009.

* — соответствующие номера WDCM.

— ранее обозначался как Enterobacter aerogenes.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для образцов выделенных микроорганизмов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным лабораторным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Условия хранения и срок годности

Храните сухой препарат при температуре 10–30 °C в плотно закрытой упаковке. Приготовленную среду храните при температуре 2–8 °C.

Используйте препарат до даты окончания срока годности, указанной на этикетке. После вскрытия плотно закрывайте флакон и храните продукт в сухом состоянии, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к комкованию.

Храните препарат в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экст