Дезоксихолат-цитратный агар HiMedia M065-500G (уп/500 гр)

Селективная диагностическая питательная среда Дезоксихолат-цитратный агар HiMedia M065-500G (уп/500 гр) с содержанием агара 13,500 г/л. Среда предназначена для выделения энтеропатогенов, прежде всего Salmonella и Shigella, из клинических, пищевых и других санитарно-бактериологических образцов; для выделения Shigella рекомендуется менее ингибирующая среда.

Назначение

Дезоксихолат-цитратный агар HiMedia M065-500G применяют для селективного выделения возбудителей кишечных инфекций, особенно бактерий групп Salmonella и Shigella, из клинических образцов и пищевых продуктов.

• Тип питательной среды: диагностический агар
• Назначение: выделение энтеропатогенов
• Регистрационное обозначение: ФСЗ 2009/03709

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для обеспечения заданных характеристик работы среды. Твёрдые вещества HI эквивалентны твёрдым веществам сердечно-мозгового экстракта.

• Конечный pH при 25 °C: 7,5 ± 0,2
• Растворимость: 70,52 г сухой среды на 1000 мл воды

Принцип действия и интерпретация

Дезоксихолат-цитратный агар приготовлен по модифицированной формуле Лейфсона. Среда используется для выделения и максимального восстановления кишечных патогенов групп Salmonella и Shigella из пищевых продуктов.

Селективность среды позволяет использовать достаточно большие посевные дозы без риска подавления роста Shigella и Salmonella сопутствующей микрофлорой. Для рутинного исследования образцов кала и мочи рекомендуется одновременно применять другие среды, например агар МакКонки M082 и висмут-сульфитный агар M027.

По сравнению с дезоксихолатным агаром эта среда обладает умеренно повышенной селективностью в отношении энтеропатогенов благодаря увеличенной концентрации цитратов и дезоксихолатных солей:

• дезоксихолат натрия при pH 7,3–7,5 ингибирует грамположительные бактерии;
• цитратные соли в концентрации, предусмотренной рецептурой, ингибируют грамположительные бактерии и большинство других представителей нормальной кишечной микрофлоры;
• твёрдые вещества HI служат источником углерода и азота; этот компонент обеспечивает более выраженное ингибирование колиформ по сравнению с экстрактом или простым пептоном;
• протеозопептон обеспечивает среду углеродом, азотом, витаминами и минеральными веществами;
• дезоксихолат натрия, цитрат натрия и цитрат аммония железа ингибируют или значительно подавляют колиформные и грамположительные бактерии;
• лактоза используется для дифференциации кишечных палочек: ферментирующие лактозу бактерии образуют красные колонии, а неферментирующие — бесцветные;
• присутствующие колиформные бактерии образуют на среде розовые колонии;
• расщепление лактозы вызывает подкисление среды вокруг соответствующих колоний, в результате чего индикатор pH нейтральный красный изменяет цвет на красный;
• вокруг таких колоний обычно формируется мутная зона осаждённой дезоксихолевой кислоты вследствие подкисления среды;
• дезоксихолат натрия соединяется с нейтральным красным в кислой среде, в результате чего краситель выходит из раствора и происходит осаждение дезоксихолата;
• восстановление цитрата аммония железа до сульфида железа выявляется по образованию чёрного сульфида железа;
• виды Salmonella и Shigella не ферментируют лактозу, однако Salmonella может продуцировать H₂S, образуя бесцветные колонии с чёрными центрами или без них.

Сочетание цитрата и железа оказывает выраженное гидролизующее воздействие на агар при нагревании, из-за чего формируется мягкий и неэластичный гель. После автоклавирования агар становится мягким и практически непригодным для посева штрихом.

Увеличение концентрации дезоксихолата натрия до 0,1 % и выше ингибирует Salmonella Gallinarum. Поверхностные колонии неферментирующих лактозу бактерий часто поглощают небольшое количество красителя из среды и приобретают розоватый оттенок, поэтому такие микроорганизмы можно ошибочно принять за колиформы.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 70,52 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Не автоклавируйте. Избегайте чрезмерного нагревания, поскольку он ухудшает свойства среды.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Типы образцов

• Клинические образцы кала
• Клинические образцы мочи
• Пищевые образцы

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным методическим руководствам.

Для пищевых образцов используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Назначение: диагностика in vitro.
• Использование: только квалифицированным персоналом.
• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Разные микроорганизмы имеют различные требования к условиям роста и могут демонстрировать неодинаковую картину роста на этой среде.
2. Каждая серия среды проверяется на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа. При необходимости выявления микроорганизмов, не указанных в сертификате анализа, пользователь должен валидировать среду с учётом конкретных требований.
3. Для подтверждения вида требуется дальнейшая биохимическая идентификация.
4. Для выделения Shigella следует использовать менее ингибирующую питательную среду.
5. Показатели работы среды гарантируются при приготовлении и применении согласно маркировке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовато-бежевый однородный сыпучий порошок.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с гелем 1,35 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красновато-оранжевого цвета.

Реакция

• Раствор: водный раствор с концентрацией 7,05 % масс./об.
• Температура измерения pH: 25 °C
• pH: 7,5 ± 0,2

Диапазон pH

pH: 7,30–7,70

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.