HiMedia M065-100G Дезоксихолат-цитратный агар

Питательная микробиологическая среда HiMedia M065-100G «Дезоксихолат-цитратный агар» производства HiMedia предназначена для селективного выделения кишечных патогенов, включая Salmonella и Shigella. Дезоксихолат-цитратный агар применяют для клинических, пищевых и санитарно-бактериологических исследований, при этом для выделения Shigella рекомендуется использовать менее ингибирующую среду.

Назначение

Дезоксихолат-цитратный агар рекомендован для выделения кишечных патогенов, прежде всего видов Salmonella и Shigella, из клинических образцов. Среда применяется для исследования:

• клинических образцов кала;
• образцов мочи;
• пищевых образцов.

Для рутинного исследования образцов кала и мочи рекомендуется использовать среду совместно с другими питательными средами, например агаром МакКонки (M082) и висмут-сульфитным агаром (M027).

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Сухие вещества сердечной инфузии (HI solids) эквивалентны сухим веществам среды Heart Infusion и служат источником углерода и азота.

• Конечный pH при 25 °C: 7,5 ± 0,2
• Масса упаковки: 100 г
• Физическая форма: порошок
• Тип продукта: стандартный
• Происхождение: животное
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)

Приготовление среды

1. Суспендируйте 70,52 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Не автоклавируйте среду.
4. Не допускайте чрезмерного нагревания, поскольку перегрев ухудшает свойства среды.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация результатов

Дезоксихолат-цитратный агар приготовлен по модифицированной формуле Лейфсона. Среда предназначена для выделения и максимального восстановления кишечных патогенов групп Salmonella и Shigella из пищевых продуктов.

Селективность среды позволяет использовать достаточно большие посевные дозы без риска подавления роста Shigella и Salmonella из-за чрезмерного разрастания другой микрофлоры. Для выделения Shigella рекомендуется менее ингибирующая питательная среда.

По сравнению с дезоксихолатным агаром среда обладает более выраженной селективностью в отношении кишечных патогенов благодаря повышенным концентрациям цитрата и дезоксихолатных солей:

• дезоксихолат натрия при pH 7,3–7,5 ингибирует грамположительные бактерии;
• цитратные соли в концентрации, предусмотренной рецептурой, ингибируют грамположительные бактерии и большинство других представителей нормальной кишечной микрофлоры;
• сухие вещества сердечной инфузии служат источником углерода и азота; этот компонент обеспечивает более выраженное подавление колиформ по сравнению с экстрактом или простым пептоном;
• пептон протеозный обеспечивает среду углеродом, азотом, витаминами и минеральными веществами;
• дезоксихолат натрия, цитрат натрия и цитрат аммония железа ингибируют или значительно подавляют колиформные и грамположительные бактерии;
• лактоза используется для дифференциации кишечных бацилл.

Лактозосбраживающие микроорганизмы образуют красные колонии, а нелактозосбраживающие — бесцветные. Колиформные бактерии, если присутствуют, образуют на этой среде розовые колонии. Расщепление лактозы подкисляет среду вокруг соответствующих колоний, вследствие чего индикатор pH нейтральный красный изменяет цвет на красный.

Вокруг таких колоний обычно формируется мутная зона осаждённой дезоксихолевой кислоты, возникающая вследствие подкисления среды. В кислой среде дезоксихолат натрия соединяется с нейтральным красным, в результате чего краситель выходит из раствора с последующим осаждением дезоксихолата.

Восстановление цитрата аммония железа до сульфида железа определяется по образованию чёрного сульфида железа. Виды Salmonella и Shigella не сбраживают лактозу, однако Salmonella может продуцировать H₂S, образуя бесцветные колонии с чёрным центром или без него.

Сочетание цитрата и железа оказывает выраженное гидролизующее воздействие на агар при нагревании, в результате чего формируется мягкий и неэластичный гель. После автоклавирования агар становится мягким, и выполнять штриховой посев становится практически невозможно.

Salmonella Gallinarum подавляется при увеличении концентрации дезоксихолата натрия до 0,1 % и выше. Поверхностные колонии нелактозосбраживающих микроорганизмов часто поглощают небольшое количество красителя из среды и приобретают розоватый оттенок, из-за чего такие микроорганизмы можно ошибочно принять за колиформы.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами.

Для пищевых образцов используйте соответствующие методы отбора и обработки проб в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Условия применения и меры предосторожности

• Назначение: диагностика in vitro.
• Применение: только квалифицированным персоналом.
• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Указания по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения метода

1. Отдельные микроорганизмы отличаются по требованиям к условиям роста и могут демонстрировать различные варианты роста на среде.
2. Каждая партия среды проверена на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа. При необходимости применения среды для конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, пользователь должен валидировать среду с учётом собственных требований.
3. Для подтверждения видовой принадлежности требуется дополнительная биохимическая идентификация.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, легко сыпучий порошок от светло-жёлтого до розовато-бежевого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,35%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красновато-оранжевого цвета.

Реакция

Реакция 7,05%-ного водного раствора при 25 °C: pH 7,5 ± 0,2