Дифференциальная питательная среда HiMedia M057-100G «Двухсахарный агар, Рассел» предназначена для дифференциации грамотрицательных кишечных бацилл по ферментации декстрозы и лактозы с образованием или без образования газа. Агар применяется для анализа выделенных из клинических образцов микроорганизмов; готовая среда содержит феноловый красный и имеет конечный pH 7,3 ± 0,2 при 25 °C.

Назначение

Среда рекомендована для дифференциации грамотрицательных кишечных бацилл на основании способности ферментировать декстрозу и лактозу с образованием или без образования газа.

Тип образца: выделенные микроорганизмы из клинических образцов.

Состав

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с рабочими параметрами. Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту.

Методика приготовления

1. Приготовьте суспензию из 44,02 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду по пробиркам или в предназначенные для этого ёмкости.
4. Стерилизуйте в автоклаве при 118–121 °C в течение 15 мин; соответствующее давление составляет приблизительно 0,083–0,103 МПа (12–15 фунтов на кв. дюйм соответственно).
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. Дайте пробиркам застыть в наклонном положении, чтобы сформировать высокий столбик среды.

Принцип действия и интерпретация

Грамотрицательные бациллы семейства Enterobacteriaceae являются одними из наиболее часто выявляемых бактериальных изолятов в клинических образцах. Окончательная идентификация представителей Enterobacteriaceae требует проведения комплекса биохимических тестов.

Двухсахарный агар, Рассел применяют для дифференциации грамотрицательных кишечных бацилл по способности ферментировать декстрозу и лактозу с образованием или без образования газа. Среда первоначально была разработана Расселом с использованием индикатора лакмуса. Позднее Николс, а затем Николс и Вуд заменили лакмусовый индикатор феноловым красным.

Среда используется для дифференциации грамотрицательных кишечных бацилл, особенно представителей кишечной, тифозно-сальмонеллёзной и дизентерийной групп, по ферментации двух введённых в состав углеводов — декстрозы и лактозы.

После инкубации засеянной среды в пробирке образование кислоты в аэробных условиях на скошенной части и в анаэробных условиях в столбике выявляют по изменению цвета индикатора. Феноловый красный служит индикатором pH среды. Газообразование при ферментации проявляется расщеплением агара или образованием пузырьков в столбике.

Микроорганизмы, такие как Salmonella Typhi, способные ферментировать декстрозу, но не лактозу, в течение короткого периода инкубации дают начальную кислую реакцию на скошенной части. По мере потребления декстрозы реакция в аэробных условиях меняется на щелочную вследствие окисления кислот. В анаэробных условиях в столбике тот же микроорганизм не изменяет реакцию на обратную и сохраняет кислую среду.

Функции компонентов:

• Пептон, триптон и пептон HM B служат источниками углерода, азота, витаминов и других необходимых питательных веществ.
• Лактоза и декстроза служат источниками энергии в качестве ферментируемых углеводов.
• Феноловый красный является индикатором pH: в щелочных условиях имеет розовый цвет, в кислых условиях — жёлтый.
• Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды.

Для инокуляции пробирок используют чистые культуры.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.

Ограничения

• Результаты необходимо регистрировать в установленное время; несоблюдение времени может привести к ошибочным результатам.
• Для подтверждения необходимо одновременно проводить другие биохимические тесты.

Рабочие характеристики и оценка

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при применении в соответствии с инструкцией на этикетке, в течение срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный, легко сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенной среды образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с массовой концентрацией 4,4 % при 25 °C.

pH: 7,3 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–40 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Klebsiella aerogenes ранее обозначалась как Enterobacter aerogenes.

Proteus hauseri ранее обозначалась как Proteus vulgaris.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения: плотно закрытый контейнер.
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия плотно закройте флакон и храните продукт в сухом состоянии для предотвращения образования комков вследствие гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования плотно закрывайте контейнер.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются наилучшим образом при использовании в течение указанного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте утверждённые лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Технические характеристики

Область применения

Среда предназначена для профессионального применения в микробиологических и клинико-диагностических лабораториях при дифференциации грамотрицательных кишечных бацилл, включая микроорганизмы кишечной, тифозно-сальмонеллёзной и дизентерийной групп.

Сравнительный контекст

Дифференциация в среде основана одновременно на ферментации декстрозы и лактозы, изменении окраски фенолового красного в аэробных и анаэробных условиях и выявлении газообразования по расщеплению агара или пузырькам в столбике.