Основа агара Бэрда-Паркера HiMedia M043-500G (уп/500 гр)

Питательная диагностическая среда Основа агара Бэрда-Паркера HiMedia M043-500G (уп/500 гр) в порошковой форме, рассчитанная на приготовление из 63,0 г среды на 1 л воды. Предназначена для выделения и количественного определения коагулазоположительных стафилококков в пищевых, молочных и клинических образцах; идентификацию Staphylococcus aureus необходимо подтверждать коагулазной реакцией.

Назначение

Основа агара Бэрда-Паркера применяется для выделения и подсчёта коагулазоположительных стафилококков из пищевых продуктов, молочных продуктов, клинических образцов и другого исследуемого материала.

• Тип питательной среды: диагностический
• Назначение изделия: основа
• Форма выпуска: порошок
• Производитель: HiMedia
• Сертификат: ФСЗ 2009/03709
• Упаковка: 500 г
• Материал упаковки: HDPE (полиэтилен высокой плотности)
• Происхождение компонентов: животное
• Тип продукта: стандартный

Применение среды соответствует требованиям ГОСТ Р 54354-2011.

Состав

Суспензия готовится из 63,0 г сухой основы на 1 л очищенной или дистиллированной воды.

Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения рабочих характеристик. Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 63,0 г порошка в 950 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 50 °C.
5. В асептических условиях добавьте один из вариантов селективно-дифференциальных компонентов:
   • 50 мл концентрированной эмульсии яичного желтка FD045;
   • 3 мл стерильной 3,5%-ной добавки теллурита калия FD047 — по 1 мл из флакона;
   • 50 мл эмульсии яичного желтка с теллуритом FD046.
6. При необходимости дополнительной селективности добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки сульфаметазина для среды Бэрда-Паркера FD069.
7. В качестве альтернативы допускается использовать один флакон ингибитора FPT FD195 на 90 мл среды вместо эмульсии яичного желтка с теллуритом FD046 для идентификации коагулазоположительных стафилококков.
8. Тщательно перемешайте среду и разлейте в стерильные чашки Петри.

Для варианта с ингибитором FPT FD195 растворите содержимое флакона в 10 мл стерильной дистиллированной воды и добавьте к 90 мл стерильной расплавленной среды, выдерживаемой при 45–50 °C.

Принцип действия и интерпретация

Агар Бэрда—Паркера разработан на основе теллурит-глициновой формулы Зебовица и предназначен для выделения и количественного определения стафилококков в пищевых продуктах и другом материале с дифференциацией коагулазоположительных штаммов.

Между коагулазной реакцией и появлением прозрачной зоны липолиза на среде существует высокая корреляция. Прозрачная зона образуется вследствие действия стафилококковой лецитиназы, расщепляющей яичный желток. Почти 100 % коагулазоположительных стафилококков способны восстанавливать теллурит, вследствие чего формируются чёрные колонии; другие стафилококки не всегда обладают такой способностью.

Хлорид лития и теллурит калия подавляют большинство сопутствующих микроорганизмов, за исключением Staphylococcus aureus. Теллуритная добавка токсична для не относящихся к S. aureus штаммов, вызывающих просветление яичного желтка, и придаёт колониям чёрную окраску.

Триптон, пептон HM B и дрожжевой экстракт служат источниками азота, углерода, серы и витаминов. Пируват натрия защищает повреждённые клетки, способствует их восстановлению и стимулирует рост Staphylococcus aureus, не снижая селективности среды. Глицин и пируват усиливают рост стафилококков.

После добавления яичного желтка среда становится жёлтой и непрозрачной. Эмульсия яичного желтка обогащает среду и обеспечивает идентификацию микроорганизмов по лецитиназной активности — реакции яичного желтка. Прозрачная зона и серо-чёрные колонии являются диагностическими признаками коагулазоположительных стафилококков. При дальнейшем инкубировании вокруг колоний может образовываться непрозрачная зона вследствие липолитической активности.

Идентичность выделенного на агаре Бэрда—Паркера Staphylococcus aureus необходимо подтверждать коагулазной реакцией. Среда также может использоваться для выявления коагулазной активности при добавлении фибриногеновой плазмы.

При использовании ингибитора FPT FD195 отсутствие эмульсии яичного желтка требует восстановления теллурита. На такой среде агар становится прозрачным, а коагулазоположительные колонии через 24–48 ч инкубирования при 35 °C приобретают окраску от белой до серо-чёрной и окружены непрозрачной зоной, связанной с коагулазной активностью. Колонии стафилококков могут иметь белую или серую окраску.

Для количественного определения выбирают 20–200 колоний. Колонии, похожие на Staphylococcus aureus, подсчитывают и проверяют коагулазной реакцией. Результат представляют как количество Staphylococcus aureus на 1 г пищевого продукта.

Добавление сульфаметазина в концентрации 50 мг/л подавляет рост и роение видов Proteus.

Методика посева и учёта результатов

1. Исследуемый материал вносят в объёме 0,1 мл на одну чашку Петри диаметром 90–100 мм.
2. Инкубируют при 37 °C.
3. Первый учёт проводят через 24–26 ч.
4. Колонии Staphylococcus aureus имеют чёрную блестящую окраску, тонкий белый ободок и окружены прозрачной зоной.
5. Чашки дополнительно инкубируют при 37 °C ещё 24 ч.
6. По завершении дополнительной инкубации проводят коагулазную реакцию колоний, соответствующих указанным морфологическим признакам и сформировавшихся в течение дополнительного периода инкубации.

Приготовленные чашки следует использовать в день приготовления или в течение 48 ч, чтобы избежать потери чёткости зон преципитации. Базальная среда без эмульсии яичного желтка и теллурита стабильна.

Некоторые сопутствующие микроорганизмы могут разрушать ореол коагулазной реакции. На среде могут расти и другие бактерии; биохимические тесты позволяют отличить коагулазоположительные стафилококки от прочих микроорганизмов.

Исследуемые образцы

• Клинические образцы: гной, материал из ран.
• Пищевые и молочные образцы.

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим методическим указаниям. Для клинических образцов используйте установленные методы обращения с исследуемым материалом.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 2,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базальная среда: жёлтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• После добавления эмульсии яичного желтка и теллуритной эмульсии: жёлтый непрозрачный гель в чашках Петри.

Реакция и pH

• Реакция 6,3%-ного водного раствора при 25 °C: pH 7,0 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивали после инкубирования при 35–37 °C в течение 24–48 ч. Степень восстановления принята за 100 % для роста бактерий на соево-казеиновой агаровой среде.