Питательная среда HiMedia M043-100G Основа агара Бэрд-Паркера — порошковая основа для приготовления агара Бэрд-Паркера с конечным pH 7,0±0,2. Применяется для выделения и количественного определения коагулазоположительных стафилококков в пищевых, молочных и клинических образцах, включая гной и материал из ран.

Назначение

Основа агара Бэрд-Паркера HiMedia M043-100G предназначена для приготовления селективной питательной среды для выделения и количественного определения коагулазоположительных стафилококков из пищевых и клинических образцов.

Состав

Формула рассчитана на 1 л среды.

Эквивалент мясного экстракта.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных показателей эффективности.

Конечный pH при 25 °C: 7,0±0,2.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 63,0 г порошка в 950 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 50 °C.
5. В асептических условиях добавьте один из вариантов добавок:
   • 50 мл концентрированной эмульсии яичного желтка FD045 и 3 мл стерильной селективной добавки PTe 3,5 % FD047, рассчитанной как 1 мл на флакон;
   • 50 мл эмульсии яичного желтка с теллуритом FD046, рассчитанной как 100 мл на флакон.
6. При необходимости дополнительного повышения селективности добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки BP S FD069.
7. В качестве альтернативы для идентификации коагулазоположительных стафилококков можно использовать один флакон ингибитора FPT FD195 на 90 мл среды вместо эмульсии яичного желтка с теллуритом FD046.
8. Тщательно перемешайте среду и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип измерения и интерпретация

Агар Бэрд-Паркера был разработан Baird Parker на основе теллурит-глициновой рецептуры Zebovitz и предназначен для выделения и количественного определения стафилококков в пищевых продуктах и других материалах. Среда обеспечивает дифференциацию коагулазоположительных штаммов.

Между результатом коагулазной реакции и наличием прозрачной зоны липолиза на среде выявлена высокая корреляция. Прозрачная зона формируется вследствие действия лецитиназы стафилококков, расщепляющей яичный желток. Почти 100 % коагулазоположительных стафилококков способны восстанавливать теллурит, в результате чего образуются чёрные колонии; другие стафилококки не всегда обладают такой способностью.

Среда менее ингибирующая для Staphylococcus aureus, чем другие среды, и одновременно обладает большей селективностью. Агар Бэрд-Паркера был принят AOAC International и рекомендован Фармакопеей США для проведения испытаний на микробиологические пределы. Комитет ISO также рекомендовал эту среду для выделения и количественного определения стафилококков.

Идентификация выделенного на агаре Бэрд-Паркера Staphylococcus aureus должна подтверждаться коагулазной реакцией. Для выявления коагулазной активности в среду также можно добавить плазму с фибриногеном.

Для применения ингибитора FPT FD195 растворите содержимое в 10 мл стерильной дистиллированной воды и добавьте к 90 мл стерильной расплавленной среды, выдерживаемой при 45–50 °C. На такой среде коагулазоположительные колонии через 24–48 ч инкубации при 35 °C приобретают окраску от белой до серо-чёрной и окружены непрозрачной зоной, обусловленной коагулазной активностью.

При отсутствии эмульсии яичного желтка восстановление теллурита необходимо. В результате образуется прозрачный агар, а колонии стафилококков имеют окраску от белой до серой.

Для количественного определения выбирайте от 20 до 200 колоний. Подсчитайте колонии, типичные для Staphylococcus aureus, и исследуйте их на коагулазную реакцию. Результат выражайте как количество Staphylococcus aureus на 1 г пищевого продукта.

Добавление сульфаметазина в концентрации 50 мг/л подавляет рост и роение видов Proteus.

Триптон, пептон HM B и дрожжевой экстракт служат источниками азота, углерода, серы и витаминов. Пируват натрия защищает повреждённые клетки, способствует их восстановлению и стимулирует рост Staphylococcus aureus, не снижая селективности среды.

Хлорид лития и теллурит калия ингибируют большинство сопутствующей микрофлоры, за исключением Staphylococcus aureus. Добавка теллурита токсична для лецитиназоположительных штаммов, отличных от S. aureus, и придаёт колониям чёрную окраску.

Глицин и пируват усиливают рост стафилококков. После добавления яичного желтка среда становится жёлтой и непрозрачной. Эмульсия яичного желтка не только обогащает среду, но и помогает идентификации микроорганизмов по лецитиназной активности — реакции на яичный желток.

Прозрачная зона и серо-чёрные колонии на этой среде являются диагностическими признаками коагулазоположительных стафилококков. При дальнейшем инкубировании вокруг колоний формируется непрозрачная зона, которая может быть обусловлена липолитической активностью.

Методика посева и учёта результатов

1. Исследуемый материал внесите из расчёта 0,1 мл на чашку диаметром 90–100 мм.
2. Инкубируйте чашки при 37 °C.
3. Первичный учёт выполните через 24–26 ч.
4. Колонии Staphylococcus aureus имеют чёрную блестящую окраску, тонкий белый край и окружены прозрачной зоной.
5. Продолжите инкубацию при 37 °C ещё 24 ч.
6. Выполните коагулазный тест для колоний с указанными характеристиками, сформировавшихся в течение дополнительного периода инкубации.

Чашки следует использовать в день приготовления или в течение 48 ч после приготовления, чтобы избежать потери чёткости преципитационных зон.

Базальная среда без яичного желтка и теллурита обладает стабильностью. Колонии некоторых контаминирующих организмов могут разрушать ореол коагулазной реакции. На среде могут расти и другие бактерии; биохимические тесты позволяют отличить коагулазоположительные стафилококки от других микроорганизмов.

Типы образцов

• Клинические образцы: гной, материал из ран.
• Пищевые и молочные образцы.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и подготовки проб согласно установленным методическим рекомендациям.

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным методическим рекомендациям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным рекомендациям.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Несмотря на рекомендацию среды для выявления коагулазоположительного Staphylococcus aureus, на среде могут расти другие бактерии.