Агар для испытания витамина B12 HiMedia M036-100G (уп/100 г)

Сухая питательная среда Агар для испытания витамина B12 HiMedia M036-100G (уп/100 г) производства HiMedia. Предназначена для микробиологического количественного определения витамина B12 с использованием тест-культуры Lactobacillus leichmannii ATCC 7830.

Принцип измерения

Среда представляет собой комплекс питательных веществ, полностью лишенный витамина B12, но содержащий все остальные витамины и компоненты, необходимые для роста Lactobacillus leichmannii ATCC 7830. Принцип анализа основан на том, что рост данной тест-культуры напрямую зависит от концентрации добавленного витамина B12.

Количественное определение проводится путем построения стандартной кривой на основе известных разведений эталона витамина B12. Рост микроорганизмов измеряется турбидиметрически (по помутнению) или ацидиметрически. Концентрация витамина B12 в исследуемом образце рассчитывается путем сопоставления полученных данных с градуировочным графиком, где абсорбция является функцией концентрации витамина.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Инокулят готовится путем пересева из стоковой культуры, созданной методом укольного посева.
2. Свежепересеянные организмы инкубируют при 37 °C в течение 24 часов.
3. После инкубации культуру центрифугируют, промывают и суспендируют в 10 мл физиологического раствора.

Приготовление среды и проведение анализа

1. Суспендируйте 8,45 г порошка в 100 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте до полного растворения компонентов. Тщательно перемешайте для равномерного распределения небольшого количества осадка.
3. Распределите по 5 мл среды в каждую пробирку для анализа (содержащую возрастающие количества стандарта или исследуемого вещества).
4. Доведите общий объем в каждой пробирке до 10 мл путем добавления дистиллированной воды.
5. Стерилизуйте среду в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,07 МПа / 15 lbs) в течение 5 минут.
6. Сразу после стерилизации охладите среду.

Для получения удовлетворительных результатов рекомендуются уровни витамина B12 (цианокобаламина) в каждой пробирке (10 мл): 0; 0,025; 0,05; 0,075; 0,1; 0,125; 0,15 и 0,2 нг.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Физико-химические показатели

• Конечный pH (при 25 °C): 6,1 ± 0,2
• Диапазон pH: 5,90–6,30
• Внешний вид порошка: от кремового до желтого однородного цвета, склонность к образованию мягких комков, легко разрушаемых до состояния порошка.
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-янтарный прозрачный раствор, может содержать небольшой осадок.

Параметры контроля качества

• Рост: наблюдается постепенное увеличение роста при повышении уровней стандартного цианокобаламина USP (от 0 до 0,2 нг на пробирку), что фиксируется как эквивалентное увеличение абсорбции при 620 нм.
• Культуральный ответ: микробиологический анализ витамина B12 проводится с использованием Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Общие спецификации

Область применения

Среда используется для количественного анализа содержания витамина B12 в различных образцах. Состав соответствует требованиям Фармакопеи США (USP) и методам AOAC. Применяется в фармацевтических и биохимических лабораториях для контроля качества препаратов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение сухой и приготовленной среды: при температуре 2–8 °C.
• Требования к хранению: в сухом, вентилируемом помещении, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания.
• Особенности: из-за гигроскопичности продукта после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать для предотвращения комкования.

Ограничения и предостережения

• Для полной идентификации микроорганизмов требуются дополнительные биохимические тесты.
• Необходимо использовать исключительно чистую стеклянную посуду, не подвергавшуюся воздействию моющих средств. Даже минимальное загрязнение посторонними веществами может привести к ошибочным результатам.
• Тест-организм должен культивироваться и поддерживаться на специализированных рекомендуемых средах.

Меры безопасности и утилизация

• При работе использовать защитные перчатки, спецодежду и средства защиты глаз/лица.
• Соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности.
• Утилизация: использованные или непригодные препараты должны быть обеззаражены путем автоклавирования и/или инсинерации в соответствии с лабораторными протоколами по обращению с инфекционными материалами.