Питательная среда «Агар для испытания витамина B12 HiMedia M036-100G (уп/100 г)» предназначена для микробиологического определения витамина B12 и содержит все необходимые для роста питательные компоненты, кроме витамина B12. Среда применяется с тест-культурой Lactobacillus leichmannii ATCC 7830; тип образца — чистые изоляты.

Назначение

Среда предназначена для микробиологического количественного определения витамина B12 с использованием Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 в качестве тест-организма.

Сертификат: ФСЗ 2009/03707
Производитель: HiMedia
Форма продукта: порошок
Тип продукта: стандартный
Происхождение компонентов: животное
Тип упаковки: стеклянный флакон
Масса упаковки: 100 г

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Эквивалентен кислотному гидролизату казеина без витаминов.

Конечный pH при 25 °C: 6,1 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация результатов

Виды рода Lactobacillus плохо растут на неселективных питательных средах и требуют специальных питательных компонентов. Среды для определения витаминов применяются при микробиологическом анализе витаминов и подразделяются на три типа:

• поддерживающие среды — для хранения маточной культуры;
• среды для посевного материала — для подготовки инокулята;
• аналитические среды — для количественного определения исследуемого витамина.

Среда для испытания витамина B12 не содержит витамина B12, но включает остальные витамины и питательные вещества, необходимые для роста Lactobacillus leichmannii ATCC 7830. Методика впервые описана Capp и соавторами и рекомендована USP и AOAC с использованием Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 в качестве тест-организма.

Градуировочную кривую строят по известным разведениям стандартов витамина B12. Для анализа используют стандартные уровни цианокобаламина 0; 0,025; 0,05; 0,075; 0,1; 0,125; 0,15 и 0,2 нг на аналитическую пробирку объёмом 10 мл.

Посевной материал для анализа получают пересевом из маточной культуры, предварительно приготовленной методом посева уколом. Рекомендуется использовать свежепересеянную культуру, инкубированную при 37 °C в течение 24 ч, после чего культуру центрифугируют, промывают и суспендируют в 10 мл физиологического раствора.

Полученный прирост измеряют турбидиметрически или ацидиметрически. Градуировочную кривую строят как зависимость оптической плотности от концентрации витамина B12. Концентрацию витамина B12 в исследуемой пробе рассчитывают по градуировочной кривой.

Необходимо исключить загрязнение среды и стеклянной посуды, используемой для анализа. Следует применять чистую стеклянную посуду, не содержащую следов моющих средств. Даже небольшое количество посторонних загрязнений может привести к ошибочным результатам. Тест-культура, используемая для инокуляции, должна культивироваться и поддерживаться на средах, рекомендованных для этой цели.

Методика приготовления и проведения анализа

1. Суспендируйте 8,45 г порошка в 100 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте для равномерного распределения небольшого количества осадка.
4. Для анализа внесите по 5 мл среды в каждую аналитическую пробирку, содержащую возрастающие количества стандарта или исследуемой пробы.
5. Доведите общий объём в каждой пробирке до 10 мл добавлением дистиллированной воды.
6. Стерилизуйте среду в автоклаве при температуре 121 °C в течение 5 мин; указанное производителем давление составляет 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа).
7. Немедленно охладите приготовленную среду.
8. Для получения стандартной кривой используйте цианокобаламин в количествах 0; 0,025; 0,05; 0,075; 0,1; 0,125; 0,15 и 0,2 нг на аналитическую пробирку объёмом 10 мл.
9. Инокулируйте пробирки подготовленным посевным материалом Lactobacillus leichmannii ATCC 7830.
10. После инкубации оцените рост турбидиметрически или ацидиметрически и рассчитайте содержание витамина B12 по стандартной кривой.

Технические характеристики

• Назначение: микробиологическое определение витамина B12
• Тест-организм: Lactobacillus leichmannii ATCC 7830
• Тип образца: чистые изоляты
• Форма выпуска: порошок
• Масса: 100 г
• Растворение: 8,45 г в 100 мл очищенной или дистиллированной воды
• Объём среды на аналитическую пробирку: 5 мл
• Конечный объём аналитической пробирки: 10 мл
• Стерилизация: автоклавирование при 121 °C в течение 5 мин
• Давление при автоклавировании: 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа)
• Конечный pH при 25 °C: 6,1 ± 0,2
• Рабочий диапазон pH: 5,90–6,30
• Метод оценки роста: турбидиметрический или ацидиметрический
• Длина волны регистрации оптической плотности: 620 нм

Контроль качества

Внешний вид

Однородный порошок кремового или жёлтого цвета с тенденцией к образованию мягких комков, которые легко разрушаются до порошкообразного состояния.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Прозрачный раствор светло-янтарного цвета; возможно наличие небольшого количества осадка.

Реакция

Реакция 8,5 % масс./об. водного раствора при 25 °C.

pH: 6,1 ± 0,2.

Рост

При повышении содержания стандартного цианокобаламина USP от 0; 0,025; 0,050; 0,075; 0,1; 0,125; 0,150 до 0,2 нг на аналитическую пробирку регистрируется постепенное увеличение роста, соответствующее увеличению оптической плотности при 620 нм.

Культуральная реакция

Микробиологическое определение витамина B12 проводят с использованием Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Пробоподготовка

Посевной материал получают пересевом из маточной культуры, предварительно приготовленной методом посева у