Питательная среда HiMedia M031I-500G Модифицированный XLD агар — селективно-дифференциальная агаризованная среда в форме порошка для микробиологических исследований. Среда предназначена для селективного выделения и количественного определения Salmonella Typhi и других видов Salmonella в пищевых продуктах, воде и других образцах; не допускается автоклавирование и перегрев при приготовлении.

Назначение

Модифицированный XLD агар применяется для селективного выделения и количественного определения Salmonella Typhi и других видов Salmonella. Состав и критерии рабочих характеристик соответствуют требованиям ISO 6579-1:2017 с поправкой 1:2020, ISO 19250:2010(E) и APHA.

Тип образца:

• пищевые продукты и мясо;
• молоко и молочные продукты;
• корма для животных;
• фекалии животных;
• образцы из окружающей среды;
• вода.

Принцип действия и интерпретация

XLD агар разработан Taylor для выделения и дифференциации кишечных патогенов, включая Salmonella Typhi, среди других видов Salmonella. Модифицированный XLD агар (M0311) предназначен для селективного выделения и количественного определения видов Salmonella в соответствии с требованиями ISO и APHA; условия инкубации пересмотрены согласно поправке 1:2020 к ISO 6579-1.

Формула среды препятствует избыточному росту других микроорганизмов поверх колоний Salmonella и Shigella.

• Дрожжевой экстракт обеспечивает микроорганизмы азотом и витаминами, необходимыми для роста.
• Ксилоза, лактоза и сахароза являются источниками ферментируемых углеводов.
• Ксилоза включена в состав преимущественно потому, что не ферментируется Shigellae, но практически всегда ферментируется энтеробактериями; это позволяет дифференцировать виды Shigella.
• Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды.
• Лизин используется для дифференциации группы Salmonella от непатогенных микроорганизмов.
• Salmonellae быстро ферментируют ксилозу, после чего запас ксилозы в среде истощается.
• Затем лизин декарбоксилируется ферментом лизиндекарбоксилазой с образованием аминов и возвратом среды к щелочному значению pH, что имитирует реакцию Shigella.
• Для предотвращения такой реакции у лизин-положительных колиформ в среду добавлены лактоза и сахароза, образующие избыток кислоты.
• Разложение ксилозы, лактозы и сахарозы до кислот изменяет цвет индикатора фенолового красного на жёлтый.
• Бактерии, декарбоксилирующие лизин до кадаверина, распознаются по появлению красной окраски вокруг колоний вследствие повышения pH.
• Реакции могут протекать одновременно или последовательно, поэтому при длительной инкубации индикатор pH может приобретать различные оттенки или менять цвет с жёлтого на красный.
• Для дополнительной дифференциации в среду включена система индикации H₂S, состоящая из тиосульфата натрия и цитрата аммония железа(III). Образующийся сероводород визуализируется по формированию колоний с чёрными центрами.
• Непатогенные продуценты H₂S не декарбоксилируют лизин; образующаяся ими кислая реакция препятствует почернению колоний.
• XLD агар является одновременно селективной и дифференциальной средой.
• Селективным агентом служит дезоксихолат натрия, поэтому среда ингибирует грамположительные микроорганизмы.

Состав среды

XLD агар по спецификации ISO 6579-1

Содержание компонентов указано в г/л.

Конечный pH при 25 °C: 7,4±0,2.

Модифицированный XLD агар M0311

Содержание компонентов указано в г/л.

Конечный pH при 25 °C: 7,4±0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Эквивалент цитрата аммония железа(III).

Приготовление среды

1. Суспендируйте 55,43 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте при частом перемешивании до закипания среды.
3. Не автоклавируйте и не допускайте перегрева.
4. Сразу перенесите среду на водяную баню при 50 °C.
5. После охлаждения разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Не рекомендуется готовить большие объёмы среды, требующие продолжительного нагревания.

Небольшое выпадение осадка возможно и является свойством среды; оно не влияет на рабочие характеристики.

Пробоподготовка и обработка образцов

Предобогащение

Образец массой 25 г внесите в 225 мл буферной пептонной воды M1494I или GM14941. Инкубируйте при 34–38 °C в течение 18 ч ± 2 ч.

Селективное обогащение

1. Внесите 0,1 мл предварительно обогащённого образца в 10 мл бульона RVS M1448I или агара MSRV M1428.
2. Инкубируйте при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
3. Внесите 1 мл культуры в бульон MKTTn M1496I.
4. Инкубируйте при 36 ± 2 °C в течение 24 ± 3 ч.

Выделение

Полученную культуру нанесите на модифицированный XLD агар M0311 и инкубируйте при 36 ± 2 °C в течение 24 ± 3 ч. Одновременно выполните высев на вторую изоляционную агаризованную среду.

Подтверждение

Для подтверждения выполняют биохимические и серологические тесты.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется красный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.

Реакция

Реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 5,54 % при 25 °C: pH 7,4±0,2.

pH

7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивали после инкубации при 34–38 °C в течение 24 ± 3 ч. Степень восстановления принимается за 100 % для роста бактерий на соево-казеиновом агаре.