HiMedia M031I-500G Модифицированный XLD агар

Селективная дифференциальная среда HiMedia M031I-500G Модифицированный XLD агар для изоляции и подсчета Salmonella Typhi и других видов Salmonella. Состав и критерии эффективности соответствуют спецификациям ISO 6579-1:2017 (с поправкой 2020), ISO 19250:2010(E) и APHA.

Принцип измерения

Модифицированный XLD агар (M0311) предназначен для селективного выделения и дифференциации энтеропатогенов, включая Salmonella Typhi, от других видов Salmonella и Shigella.

Механизм дифференциации основан на следующем:

• Питательные вещества: экстракт дрожжей обеспечивает азот и витамины, необходимые для роста.
• Углеводы: ксилоза, лактоза и сахароза служат источниками ферментируемых углеводов. Ксилоза включена в состав, так как она практически не ферментируется видами Shigella, что позволяет дифференцировать их от других энтериков.
• Лизин: используется для отличия группы Salmonella от непатогенных микроорганизмов. Salmonellae быстро ферментируют ксилозу, после чего фермент лизин-декарбоксилаза расщепляет лизин с образованием аминов, что возвращает pH среды к щелочному значению (имитируя реакцию Shigella).
• Ингибирование: для предотвращения влияния лизин-положительных колиформ добавлены лактоза и сахароза, которые вырабатывают избыток кислоты.
• Индикация pH: расщепление углеводов до кислот окрашивает индикатор феноловый красный в жёлтый цвет. Бактерии, декарбоксилирующие лизин до кадаверина, вызывают повышение pH, что проявляется красным окрашиванием вокруг колоний.
• Индикация H₂S: система из тиосульфата натрия и цитрата аммония железа(III) позволяет визуализировать выделение сероводорода, что приводит к образованию колоний с чёрными центрами. Непатогенные продуценты H₂S не декарбоксилируют лизин, поэтому кислая реакция препятствует почернению колоний.
• Селективность: дезоксихолат натрия выступает в роли селективного агента, подавляя рост грамположительных микроорганизмов.

Область применения

Среда используется для анализа следующих типов образцов:

• Пищевые продукты и мясо;
• Молоко и молочные продукты;
• Корма для животных;
• Фекалии животных;
• Образцы окружающей среды и пробы воды.

Методика проведения анализа

Пробоподготовка и обогащение

1. Преобогащение: образцы (25 г в 225 мл) помещают в буферную пептонную воду (M1494I/GM14941) и инкубируют при 34–38 °C в течение 18 ± 2 ч.
2. Селективное обогащение:
   • 0,1 мл преобогащённого образца инокулируют в 10 мл бульона RVS (M1448I) или агар MSRV (M1428), инкубируют при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
   • 1 мл культуры инокулируют в бульон MKTTn (M1496I), инкубируют при 36 ± 2 °C в течение 24 ± 3 ч.

Изоляция и подтверждение

1. Полученную культуру высевают на модифицированный XLD агар (M0311).
2. Инкубируют при 36 ± 2 °C в течение 24 ± 3 ч.
3. Параллельно проводят посев на второй изоляционный агар.
4. Для подтверждения результатов выполняют биохимические и серологические тесты.

Приготовление среды

1. Суспендировать 55,43 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревать при постоянном перемешивании до кипения.
3. ВНИМАНИЕ: не автоклавировать и не перегревать.
4. Немедленно перенести в водяную баню при 50 °C.
5. После охлаждения разлить по стерильным чашкам Петри.
6. Рекомендуется не готовить большие объёмы, требующие длительного нагрева.

Примечание: возможно появление небольшого осадка, что является естественным свойством среды и не влияет на её эффективность.

Технические характеристики

Общие параметры

• Вес: 500 г
• Внешний вид: светло-жёлтый или розовый гомогенный свободнотекущий порошок
• Желирование: плотный гель (сопоставимо с 1,5 % агаром)
• Цвет и прозрачность готовой среды: красный прозрачный или слегка опалесцирующий гель
• pH (водного раствора 5,54 % при 25 °C): 7,4 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,20–7,60
• Происхождение компонентов: животное
• Тип продукта: стандартный
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)

Состав (ISO 6579-1 Specification - XLD Agar), г/л

Состав (M0311 - XLD Agar, Modified), г/л

Контроль качества и культуральные характеристики

Инкубация проводилась при 34–38 °C в течение 24 ± 3 ч. Степень восстановления считается 100 % при росте бактерий на соево-казеиновом-пептонном агаре.

Ограничения применения

1. Возможен небольшой осадок, который не влияет на работу среды.
2. Поскольку среда основана на реакциях ферментации и продукции H₂S, для обнаружения лактозоположительных и H₂S-отрицательных штаммов следует использовать вторую среду.
3. S. Paratyphi A, S. choleraesuis, S. pullorum и S. gallinarum могут образовывать красные колонии без H₂S, что делает их схожими с видами Shigella.
4. Атипичные виды Salmonella, которые являются лактозоположительными и/или H₂S-отрицательными, должны быть подтверждены биохимическими и серологическими тестами.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

• При работе использовать защитные перчатки, одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдать стандартные правила микробиологической лабораторной практики.
• Утилизация: использованные или непригодные препараты подлежат безопасному удалению путём автоклавирования и/или сжигания в соответствии с установленными процедурами работы с инфекционными материалами.