HiMedia M031F-500G XLD агар

Селективная дифференциальная среда HiMedia M031F-500G XLD агар (ксилоза-лизин-дезоксихолат) для изоляции и подсчета Salmonella Typhi и других видов Salmonella. Рекомендуется для анализа проб пищевых продуктов в соответствии с методиками FDA BAM и APHA; вес упаковки 500 г.

Область применения

Среда предназначена для выделения и дифференциации энтеропатогенов, включая Salmonella Typhi, из проб пищевых продуктов, воды и молочных продуктов. Обладает повышенной селективностью и чувствительностью по сравнению с такими средами, как SS-агар, EMB-агар и бисмузит-сульфитный агар.

Принцип измерения и интерпретация

XLD агар является одновременно селективной и дифференциальной средой. В качестве селективного агента используется дезоксихолат натрия, который подавляет рост грамположительных микроорганизмов.

Дифференциация по углеводам и лизину

• Источники питания: Экстракт дрожжей обеспечивает азот и витамины, необходимые для роста; хлорид натрия поддерживает осмотический баланс.
• Механизм реакции: Salmonella быстро ферментируют ксилозу, истощая её запасы. Затем под действием фермента лизин-декарбоксилазы происходит декарбоксилирование лизина с образованием аминов, что приводит к возврату среды в щелочную реакцию.
• Индикация: Для предотвращения этой реакции у лизин-положительных колиформ добавлены лактоза и сахароза, которые создают избыток кислоты. Расщепление ксилозы, лактозы и сахарозы до кислоты вызывает изменение цвета индикатора фенолового красного на жёлтый. Бактерии, декарбоксилирующие лизин до кадаверина, распознаются по появлению красного окрашивания вокруг колоний из-за повышения pH.

Индикация сероводорода (H₂S)

Система индикации H₂S состоит из тиосульфата натрия и цитрата аммония-железа(III). В результате продукции сероводорода образуются колонии с чёрными центрами. Непатогенные продуценты H₂S не декарбоксилируют лизин, поэтому кислая реакция, создаваемая ими, препятствует почернению колоний.

Методика проведения анализа

Пробоподготовка

Согласно процедуре BAM, 25 г образца пищевого продукта предварительно обрабатывают подходящими разбавителями:

• Лактозным бульоном (M1003);
• Буферизированным пептон-бульоном (M614);
• Универсальным бульоном для предварительного обогащения (M1372F).

Для образцов с низкой микробной нагрузкой рекомендуется соотношение образца к бульону 1:9. Инокулированный бульон инкубируют при 35 ± 0,2 °C в течение 24 ± 2 ч.

Для образцов с высокой микробной нагрузкой 0,1 мл смеси образца смешивают с 10 мл тетратионатного бульона (M032F) и инкубируют при 43 ± 0,2 °C в течение 24 ± 2 ч.

Посев и интерпретация

1. После инкубации 10 мкл соответствующего бульона инокулируют на XLD агар (M031F).
2. Пластины инкубируют при 35 °C в течение 24 ± 2 ч.
3. Проверяют наличие колоний Salmonella.

Типичные результаты:

• Колонии Salmonella: от розовых до красных, с чёрными центрами или без них. Некоторые культуры могут иметь крупные глянцевые чёрные центры или быть почти полностью чёрными.
• Атипичные культуры Salmonella: могут образовывать жёлтые колонии с чёрными центрами или без них.
• Результаты, полученные на XLD агаре, должны быть подтверждены биохимическими тестами.

Приготовление среды

1. Суспендировать 56,93 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревать при постоянном перемешивании до кипения.
3. ЗАПРЕЩЕНО автоклавировать или перегревать.
4. Немедленно перенести в водяную баню при 50 °C.
5. После охлаждения разлить по стерильным чашкам Петри.

Примечание: Не рекомендуется готовить большие объемы, требующие длительного нагрева, так как это может привести к выпадению осадка. Незначительный осадок является присущим свойством среды и не влияет на её эффективность.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,4 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,20–7,60

Дополнительные параметры

Контроль качества

• Внешний вид: светло-жёлтый или розовый гомогенный свободнотекучий порошок.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % раствором агара.
• Цвет и прозрачность готовой среды: красный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• Реакция: pH 7,4 ± 0,2 для 5,69 % (масса/объем) водного раствора при 25 °C.

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 22–26 часов.

Ограничения и предостережения

1. Некоторые штаммы Proteus могут давать окраску от красного до жёлтого, при этом большинство колоний развивают чёрные центры, что приводит к ложноположительным реакциям.
2. Неэнтерические бактерии, такие как Pseudomonas и Providencia, могут образовывать красные колонии.
3. S. Paratyphi A, S. Choleraesuis, S. Pullorum и S. Gallinarum могут образовывать красные колонии без продукции H₂S, напоминая виды Shigella.
4. Атипичные виды Salmonella, которые являются лактозоположительными и/или H₂S-отрицательными, должны быть подтверждены биохимическими и серологическими тестами.
5. Среда общего назначения и может не поддерживать рост требовательных организмов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом месте, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты данного продукта подлежат безопасному удалению путем автоклавирования и/или сжигания в соответствии с установленными лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.