HiMedia M031F-500G XLD агар

Питательная селективно-дифференциальная среда HiMedia M031F-500G XLD агар представляет собой порошок для микробиологического анализа, с конечным pH 7,4 ± 0,2 при 25 °C. HiMedia M031F-500G применяется для выделения и количественного определения Salmonella Typhi и других видов Salmonella в пищевых образцах; среда может давать ложноположительные реакции для некоторых штаммов Proteus и красные колонии для непатогенных энтеробактерий.

Назначение и область применения

XLD агар рекомендован для выделения и количественного определения Salmonella Typhi и других видов Salmonella в соответствии с FDA BAM и APHA. Среда используется для анализа пищевых образцов, а также рекомендована для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae в воде и молочных продуктах.

XLD агар предназначен для селективного выделения и дифференциации кишечных патогенов, включая Salmonella Typhi, от других видов Salmonella. Идентификация культур, выделенных на XLD агаре, должна быть подтверждена биохимическими тестами; для атипичных видов Salmonella могут потребоваться биохимические и серологические тесты.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия установленным показателям эффективности.

• Массовая концентрация для приготовления: 56,93 г/л
• Конечный pH: 7,4 ± 0,2 при 25 °C

Принцип действия и интерпретация результатов

XLD агар предназначен для выделения и дифференциации кишечных патогенов, включая Salmonella Typhi, от других видов Salmonella. Дрожжевой экстракт обеспечивает среду азотом и витаминами, необходимыми для роста микроорганизмов. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды.

L-лизин добавлен для дифференциации группы Salmonella от непатогенных микроорганизмов. Бактерии рода Salmonella быстро ферментируют ксилозу и исчерпывают её запас. Затем лизин декарбоксилируется ферментом лизиндекарбоксилазой с образованием аминов и возвратом pH к щелочному значению.

Для предотвращения аналогичной реакции у лизин-положительных колиформ в состав добавлены лактоза и сахароза, образующие избыток кислоты. Разложение ксилозы, лактозы и сахарозы до кислот вызывает изменение окраски индикатора фенолового красного на жёлтую.

Бактерии, декарбоксилирующие лизин с образованием кадаверина, распознаются по красному окрашиванию вокруг колоний вследствие повышения pH. Реакции могут протекать одновременно или последовательно, поэтому при длительной инкубации индикатор pH может приобретать различные оттенки или менять окраску с жёлтой на красную.

Для дополнительной дифференциации в состав включена система индикации H₂S, содержащая тиосульфат натрия и цитрат аммония и железа. Образующийся сероводород визуализируется в виде колоний с чёрными центрами. Непатогенные микроорганизмы, продуцирующие H₂S, не декарбоксилируют лизин, поэтому образующаяся при их росте кислая реакция препятствует почернению колоний.

XLD агар является одновременно селективной и дифференциальной средой. Дезоксихолат натрия выполняет функцию селективного агента и подавляет рост грамположительных микроорганизмов.

По сравнению с другими чашечными средами, включая SS агар, агар ЭМБ и висмут-сульфитный агар, XLD агар предназначен для селективного выделения и дифференциации Salmonella с использованием ферментации углеводов, реакции декарбоксилирования лизина и образования H₂S.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 56,93 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте суспензию при частом перемешивании до кипения среды.
3. Не автоклавируйте и не перегревайте среду.
4. Сразу перенесите среду на водяную баню при 50 °C.
5. После охлаждения разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Не рекомендуется готовить большие объёмы среды, требующие продолжительного нагревания, поскольку это может привести к образованию осадка.

Небольшое выпадение осадка в среде возможно и является свойством состава; осадок не влияет на рабочие характеристики среды.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Тип образца: пищевые образцы.

В соответствии с процедурой BAM 25 г пищевого образца предварительно обрабатывают подходящим разбавителем, например лактозным бульоном M1003, буферным пептонным бульоном M614 или универсальным бульоном для предварительного обогащения M1372F. Выбор среды зависит от типа и свойств образца.

Для образцов с низкой микробной нагрузкой обычно рекомендуется соотношение образца и бульона 1:9.

1. Инокулированный бульон инкубируйте при 35 ± 0,2 °C в течение 24 ± 2 ч.
2. Для пищевых образцов с высокой микробной нагрузкой смешайте 0,1 мл смеси образца с 10 мл тетратионатного бульона M032F.
3. Инкубируйте смесь при 43 ± 0,2 °C в течение 24 ± 2 ч.
4. После инкубации внесите 10 мкл соответствующего бульона на XLD агар M031F.
5. Инкубируйте чашки при 35 °C в течение 24 ± 2 ч.
6. Проверьте чашки на наличие колоний Salmonella.

Типичные колонии Salmonella имеют розовую или красную окраску, с чёрными центрами или без них. Многие культуры Salmonella образуют колонии с крупными блестящими чёрными центрами или почти полностью чёрные колонии. В отдельных случаях некоторые культуры Salmonella образуют жёлтые колонии с чёрными центрами или без них.

Интерпретация культуральных признаков

Культуральные характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 22–26 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Контроль качества

• Внешний вид: порошок от светло-жёлтого до розового цвета, однородный, свободно сыпучий.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.
• Реакция: реакция водного раствора с массовой концентрацией 5,69 % при 25 °C.
• pH: 7,20–7,60.
• Конечный pH: 7,4 ± 0,2 при 25 °C.

Ограничения и мешающие факторы

1. В среде возможно небольшое выпадение осадка; это свойство состава, не влияющее на рабочие характеристики среды.
2. Среда является средой общего назначения и может не поддерживать рост требовательных микроорганизмов.
3. Некоторые штаммы Proteus могут образовывать окраску от красной до жёлтой, при этом большинство колоний развивает чёрные центры, что приводит к ложноположительным реакциям.
4. Непредставители семейства энтеробактерий, например Pseudomonas и Providencia, могут образовывать красные колонии.
5. S. Paratyphi A, S. Choleraesuis, S. Pullorum и S. Gallinarum могут образовывать красные колонии без H₂S, напоминая виды Shigella.
6. Атипичные виды