HiMedia M031F-100G XLD агар

Питательная агаризованная среда HiMedia M031F-100G XLD агар предназначена для выделения и количественного учёта Salmonella Typhi и других видов Salmonella в пищевых образцах; масса упаковки составляет 100 г. Среда применяется для селективного и дифференциального культивирования энтеробактерий, при этом не гарантирует рост требовательных микроорганизмов и может давать ложноположительные или атипичные реакции для отдельных культур.

Назначение

XLD-агар рекомендован для выделения и количественного учёта Salmonella Typhi и других видов Salmonella в соответствии с Бактериологическим аналитическим руководством FDA (FDA BAM) и методиками APHA.

Тип образца: пищевые образцы.

XLD-агар применяют для селективного выделения и идентификации Salmonella из пищевых образцов, а также для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae в воде и молочных продуктах. Культуры, выявленные на XLD-агаре, необходимо дополнительно подтверждать биохимическими тестами.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заявленных показателей эффективности.

Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация

XLD-агар предназначен для выделения и дифференциации кишечных патогенов, включая Salmonella Typhi, среди других видов Salmonella. Среда сочетает селективные и дифференциальные свойства:

• дрожжевой экстракт служит источником азота и витаминов, необходимых для роста;
• хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды;
• дезоксихолат натрия является селективным агентом и подавляет рост грамположительных микроорганизмов;
• лизин позволяет дифференцировать группу Salmonella от непатогенных микроорганизмов;
• ксилоза, лактоза и сахароза используются для выявления ферментации углеводов;
• феноловый красный является индикатором pH;
• тиосульфат натрия и цитрат аммония железа образуют систему индикации H₂S.

Сальмонеллы быстро ферментируют ксилозу, исчерпывая её запас. Затем фермент лизиндекарбоксилаза декарбоксилирует лизин с образованием аминов, что приводит к возврату pH среды в щелочную область. Для предотвращения аналогичной реакции у лизинположительных колиформ в состав включены лактоза и сахароза, образующие избыток кислоты.

Разложение ксилозы, лактозы и сахарозы до кислот вызывает изменение окраски индикатора фенолового красного на жёлтую. Бактерии, декарбоксилирующие лизин с образованием кадаверина, распознаются по красному окрашиванию вокруг колоний вследствие повышения pH. Реакции могут протекать одновременно или последовательно, поэтому при длительной инкубации индикатор pH может приобретать различные оттенки или менять окраску с жёлтой на красную.

Система индикации H₂S позволяет визуализировать образование сероводорода: в колониях формируются чёрные центры. Непатогенные продуценты H₂S не декарбоксилируют лизин; образующаяся при этом кислая реакция препятствует почернению колоний.

По селективным и дифференциальным свойствам XLD-агар отличается от таких плотных сред, как SS-агар, агар Эндо (EMB) и висмут-сульфитный агар: в описании среды указаны повышенные селективность и чувствительность по сравнению с перечисленными средами.

Методика подготовки среды

1. Суспендируйте 56,93 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте суспензию при частом перемешивании до кипения среды.
3. Не автоклавируйте и не перегревайте среду.
4. Немедленно перенесите среду в водяную баню с температурой 50 °C.
5. После охлаждения разлейте среду в стерильные чашки Петри.
6. Не рекомендуется готовить большие объёмы, требующие длительного нагревания, поскольку это может привести к образованию осадка.

Небольшое выпадение осадка в среде возможно и является свойством состава; осадок не влияет на эффективность среды.

Пробоподготовка и порядок анализа

Пробоподготовку выполняют в соответствии с процедурой BAM.

1. Возьмите 25 г пищевого образца.
2. Проведите предварительную обработку подходящим разбавителем в зависимости от типа и характера образца:
   • лактозным бульоном M1003;
   • буферизованным пептонным бульоном M614;
   • универсальным бульоном для предварительного обогащения M1372F.
3. Для образцов с низкой микробной нагрузкой используйте рекомендуемое соотношение образца и бульона 1:9.
4. Инкубируйте инокулированный бульон при 35 ± 0,2 °C в течение 24 ± 2 ч.
5. Для пищевых образцов с высокой микробной нагрузкой смешайте 0,1 мл смеси образца с 10 мл тетратионатного бульона M032F.
6. Инкубируйте смесь при 43 ± 0,2 °C в течение 24 ± 2 ч.
7. После инкубации внесите 10 мкл соответствующего бульона на поверхность ксилозо-лизин-дезоксихолатного агара M031F.
8. Инкубируйте чашки при 35 °C в течение 24 ± 2 ч.
9. Проверьте чашки на наличие колоний Salmonella.
10. Выявленные культуры дополнительно подтвердите биохимическими тестами.

Типичные колонии Salmonella имеют розовую или красную окраску с чёрными центрами или без них. Многие культуры Salmonella образуют колонии с крупными блестящими чёрными центрами либо почти полностью чёрные колонии. Отдельные культуры Salmonella могут атипично формировать жёлтые колонии с чёрными центрами или без них.

Ограничения и мешающие факторы

1. В среде может образовываться небольшой осадок; это свойство среды, не влияющее на её эффективность.
2. Среда является универсальной и может не поддерживать рост требовательных микроорганизмов.
3. Некоторые штаммы Proteus могут образовывать окраску от красной до жёлтой, при этом большинство колоний развивает чёрные центры, что приводит к ложноположительным реакциям.
4. Нэnтеробактерии, включая Pseudomonas и Providencia, могут формировать красные колонии.
5. S. Paratyphi A, S. Choleraesuis, S. Pullorum и S. Gallinarum могут образовывать красные колонии без H₂S и тем самым имитировать виды Shigella.
6. Атипичные виды *Salmon