HiMedia M031F-100G XLD агар

Селективная дифференциальная среда HiMedia M031F-100G XLD агар для изоляции и подсчёта Salmonella Typhi и других видов Salmonella. Применяется для анализа пищевых продуктов в соответствии с методиками FDA BAM и APHA; обладает повышенной чувствительностью по сравнению с агаром SS, EMB и бисмузит-сульфитным агаром.

Принцип измерения

XLD агар (ксилоза-лизин-дезоксихолат) предназначен для изоляции и дифференциации кишечных патогенов, включая Salmonella Typhi.

Механизм дифференциации основан на следующих реакциях:

• Энергетический обмен: Salmonellae быстро ферментируют ксилозу, истощая её запасы. Затем под действием фермента лизин-декарбоксилазы происходит декарбоксилирование лизина с образованием аминов, что приводит к возврату среды в щелочной pH.
• Индикация pH: Для предотвращения этой реакции у лизин-положительных колиформ добавлены лактоза и сахароза, которые вырабатывают избыток кислоты. Расщепление ксилозы, лактозы и сахарозы до кислоты вызывает изменение цвета индикатора фенолового красного на жёлтый. Бактерии, декарбоксилирующие лизин до кадаверина, характеризуются красным окрашиванием вокруг колоний из-за повышения pH.
• Определение H₂S: Система индикации сероводорода, состоящая из тиосульфата натрия и цитрата аммония железа(III), позволяет визуализировать выделяемый H₂S, что приводит к формированию колоний с чёрными центрами. Непатогенные продуценты H₂S не декарбоксилируют лизин, поэтому кислая реакция препятствует почернению колоний.
• Селективность: Дезоксихолат натрия выступает в роли селективного агента, подавляя рост грамположительных микроорганизмов.

Область применения

Среда рекомендуется для идентификации Enterobacteriaceae в воде и молочных продуктах, а также для селективного выделения Salmonella из образцов пищевых продуктов.

Ограничения и особенности

• Некоторые штаммы Proteus могут давать окраску от красной до жёлтой с чёрными центрами, что приводит к ложноположительным реакциям.
• Неэнтерические бактерии, такие как Pseudomonas и Providencia, могут образовывать красные колонии.
• S. Paratyphi A, S. Choleraesuis, S. Pullorum и S. Gallinarum могут формировать красные колонии без продукции H₂S, напоминая виды Shigella.
• Атипичные виды Salmonella, которые являются лактозоположительными и/или H₂S-отрицательными, требуют подтверждения биохимическими и серологическими тестами.
• Среда является универсальной и может не поддерживать рост требовательных (fastidious) организмов.

Методика проведения анализа

Пробоподготовка

Согласно процедуре BAM, 25 г образца пищевого продукта подвергают предварительной обработке подходящими разбавителями (например, лактозным бульоном M1003, буферизированным пептон-бульоном M614 или универсальным бульоном для предварительного обогащения M1372F).

• При низкой микробной нагрузке: соотношение образца к бульону 1:9. Инкубация при 35 ± 0,2 °C в течение 24 ± 2 ч.
• При высокой микробной нагрузке: 0,1 мл смеси образца смешивают с 10 мл тиосульфатного бульона (M032F) и инкубируют при 43 ± 0,2 °C в течение 24 ± 2 ч.

Посев и интерпретация

1. После инкубации 10 мкл соответствующего бульона инокулируют на XLD агар (M031F).
2. Пластины инкубируют при 35 °C в течение 24 ± 2 ч.
3. Типичные колонии Salmonella имеют розово-красный цвет с чёрными центрами или без них. Некоторые культуры могут иметь крупные глянцевые чёрные центры или быть почти полностью чёрными. Атипичные культуры могут быть жёлтыми с чёрными центрами или без них.
4. Результаты подтверждают биохимическими тестами.

Приготовление и хранение

Инструкция по приготовлению

1. Суспендировать 56,93 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревать при частом перемешивании до кипения. ЗАПРЕЩЕНО автоклавировать или перегревать.
3. Немедленно перенести в водяную баню при 50 °C.
4. После охлаждения разлить по стерильным чашкам Петри. Примечание: Не рекомендуется готовить большие объемы, требующие длительного нагрева, чтобы избежать выпадения осадка.

Условия хранения

• Сухая среда: хранить при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере в сухом вентилируемом месте.
• Готовая среда: хранить при температуре 20–30 °C.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,4 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,20–7,60

Дополнительные параметры

• Внешний вид: светло-жёлтый или розовый гомогенный свободно текущий порошок.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5% агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: красный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.

Контроль качества

Культуральные характеристики наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 22–26 часов.