Дезоксихолатный агар HiMedia M030-500G (уп/500 гр)

Дифференциальная питательная среда Дезоксихолатный агар HiMedia M030-500G (уп/500 гр) предназначена для прямого подсчёта колиформных микроорганизмов в молочных продуктах. Среда используется для селективного выделения Salmonella и Shigella из фекалий, ректальных тампонов и других патологических образцов; высокая селективность допускает внесение достаточно больших посевных доз, но при низкой ожидаемой выживаемости целевого возбудителя рекомендуется применять менее селективные среды параллельно.

Назначение и область применения

Дезоксихолатный агар применяют как дифференциальную среду для прямого подсчёта колиформных микроорганизмов в молоке, сливках и других молочных продуктах, а также для выделения кишечных патогенов из клинических и пищевых образцов.

Типы исследуемых образцов

• Клинические образцы: фекалии, моча и другие материалы.
• Пищевые и молочные образцы.
• Ректальные тампоны.
• Материал после культивирования в селенитовом бульоне.

Среду особенно рекомендуют для выявления Shigella и Salmonella при исследовании ректальных тампонов и фекалий. Для рутинного исследования фекалий и мочи дезоксихолатный агар рекомендуется использовать совместно с менее селективными средами, например агаром МакКонки или висмут-сульфитным агаром.

Технические характеристики

• Полное название: Дезоксихолатный агар HiMedia M030-500G (уп/500 гр)
• Производитель: HiMedia
• Тип питательной среды: диагностический
• Назначение изделия: агар
• Сертификат: ФСЗ 2009/03709
• Физическая форма: порошок
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Происхождение: животное
• Масса упаковки: 500 г
• Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,10–7,50

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Состав

Принцип действия и интерпретация

Дезоксихолатный агар приготовлен по прописи Лейфсона. Среда используется для выделения и максимального восстановления кишечных патогенов, относящихся к видам Salmonella и Shigella. Селективность среды позволяет использовать достаточно большие посевные дозы без риска подавления роста Shigella и Salmonella сопутствующей микрофлорой.

Пептон обеспечивает среду источниками углерода и азота, аминокислотами с длинной углеродной цепью, витаминами и минеральными веществами. Колиформные и грамположительные бактерии ингибируются или существенно подавляются дезоксихолатом натрия и цитратом натрия.

Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды, а дикалий гидрофосфат выполняет буферную функцию. Лактоза обеспечивает дифференциацию кишечных бацилл: лактозоферментирующие микроорганизмы образуют красные колонии, а нелактозоферментирующие — бесцветные.

При наличии колиформных бактерий на среде формируются розовые колонии. Расщепление лактозы подкисляет среду вокруг соответствующих колоний, вследствие чего индикатор pH нейтральный красный изменяет цвет на красный. Такие колонии обычно окружены мутной зоной осаждённой дезоксихолевой кислоты, образующейся в результате подкисления среды. В кислой среде дезоксихолат натрия взаимодействует с нейтральным красным, в результате чего краситель выходит из раствора с последующим осаждением дезоксихолата.

Комбинация цитрата и железа оказывает выраженное гидролизующее воздействие на агар при нагревании, образуя мягкий и неэластичный гель. После автоклавирования агар становится мягким, и посев штрихом становится практически невозможным.

Поверхностные колонии нелактозоферментирующих микроорганизмов иногда поглощают небольшое количество красителя из среды и приобретают розоватый оттенок; такие микроорганизмы можно ошибочно принять за колиформные.

Shigella и Salmonella образуют на среде бесцветные колонии. Колиформные бактерии при росте образуют розовые колонии, а при подсчёте в молоке и сливках — тёмно-красные колонии диаметром 0,5 мм.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 45,03 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Не автоклавируйте приготовленную среду.
4. Избегайте чрезмерного или продолжительного нагревания при восстановлении среды.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика прямого подсчёта колиформных бактерий в молоке и сливках

1. Внесите 1–4 мл образца или соответствующего десятикратного разведения образца в стерильную чашку Петри.
2. Добавьте 10–20 мл расплавленной и охлаждённой среды.
3. Дождитесь застывания среды.
4. Нанесите на поверхность 3–5 мл незасеянной среды.
5. После затвердевания верхнего слоя инкубируйте чашку в термостате при 30 °C в течение 24 ч.
6. Оцените рост колиформных бактерий: формируются тёмно-красные колонии диаметром 0,5 мм.

Контроль качества

Внешний вид и свойства среды

• Внешний вид порошка: однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: красновато-оранжевый прозрачный или слегка опалесцирующий гель в чашках Петри.
• Реакция: реакция 4,5 % масс./об. водного раствора при 25 °C.
• pH: 7,10–7,50.
• Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Сбор, обращение с образцами и безопасность

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным руководствам. Для пищевых и молочных образцов используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Среда предназначена для диагностики in vitro и профессионального применения. Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку. При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица. Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы и стандартные меры предосторожности при обращении с клиническими образцами. Для получения дополнительных указаний по безопасности используйте соответствующие паспорта безопасности.

Ограничения применения

1. Среда обладает высокой селективностью, поэтому рекомендуется использовать её совместно с менее селективной средой, например агаром МакКонки.
2. Среда не рекомендуется при низкой ожидаемой выживаемости целевого патогена.
3. Поверхностные колонии нелактозоферментирующих микроорганизмов могут приобретать розоватую окраску из-за поглощения красителя из среды и быть ошибочно идентифицированы как колиформные.
4. Автоклавирование приготовленной среды приводит к размягчению агара и практически исключает возможность посева штрихом.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения сухого продукта: плотно закрытый контейнер.
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Срок использования: до даты истечения срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом венти