HiMedia M030-100G Дезоксихолатный агар

Сухая дифференциальная питательная среда HiMedia M030-100G Дезоксихолатный агар производства HiMedia для прямого подсчёта колиформных бактерий в молочных продуктах. Дезоксихолатный агар применяется для выделения кишечных патогенов из клинических образцов, включая кал и ректальные мазки, при конечном pH 7,3 ± 0,2.

Назначение

Дезоксихолатный агар используют как дифференциальную среду для прямого подсчёта колиформных бактерий в молочных продуктах, а также для выделения кишечных патогенов из ректальных мазков, фекалий и других патологических образцов.

Тип образцов

• Клинические образцы: кал, моча и другие образцы.
• Пищевые и молочные образцы.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

• Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.
• Физическая форма: порошок.
• Происхождение: животное.
• Тип продукта: стандартный.
• Тип упаковки: ПЭВП (HDPE, полиэтилен высокой плотности).
• Масса: 100 г.

Принцип действия и интерпретация результатов

Дезоксихолатный агар приготовлен по рецептуре Лейфсона. Среда предназначена для выделения и максимального восстановления кишечных патогенов, относящихся к видам Salmonella и Shigella. Селективность среды допускает внесение достаточно больших посевных доз без риска чрезмерного подавления или зарастания Shigella и Salmonella другой микрофлорой.

Для рутинного исследования образцов кала и мочи рекомендуется применять Дезоксихолатный агар совместно с другими средами, включая агар МакКонки (M082) и висмут-сульфитный агар (M027). Среду также можно использовать для пересева культур из селенитового бульона. Такой подход особенно рекомендован для выявления Shigella и Salmonella при исследовании ректальных мазков и фекалий. Эти микроорганизмы образуют на Дезоксихолатном агаре бесцветные колонии.

Функции компонентов среды:

• Пептон обеспечивает источник углерода, азота, аминокислот с длинной цепью, витаминов и минеральных веществ.
• Дезоксихолат натрия и цитрат натрия ингибируют или значительно подавляют колиформные и грамположительные бактерии.
• Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды.
• Гидрофосфат дикалия выполняет буферную функцию.
• Лактоза обеспечивает дифференциацию кишечных бацилл: ферментирующие лактозу микроорганизмы образуют красные колонии, а неферментирующие лактозу — бесцветные.
• Колиформные бактерии при наличии образуют на среде розовые колонии.
• Расщепление лактозы вызывает подкисление среды вокруг соответствующих колоний, вследствие чего индикатор pH нейтральный красный изменяет цвет на красный.
• Такие колонии обычно окружены мутной зоной осаждённой дезоксихолевой кислоты, возникающей из-за подкисления среды.
• В кислой среде дезоксихолат натрия соединяется с нейтральным красным, в результате чего краситель выходит из раствора с последующим осаждением дезоксихолата.
• Сочетание цитрата и железа (Fe) оказывает выраженное гидролизующее воздействие на агар при нагревании, формируя мягкий и неэластичный гель.
• После автоклавирования агар становится мягким, и выполнение посева штриховым методом становится практически невозможным.
• Поверхностные колонии неферментирующих лактозу микроорганизмов иногда адсорбируют небольшое количество окраски из среды, приобретая розоватый оттенок; такие микроорганизмы можно ошибочно принять за колиформные бактерии.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 45,03 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Не подвергайте среду автоклавированию.
4. При восстановлении избегайте чрезмерного или продолжительного нагревания.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами.

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов в соответствии с действующими руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Среда обладает высокой селективностью, поэтому рекомендуется использовать её совместно с менее селективной средой, например агаром МакКонки.
2. Среда не рекомендуется в случаях, когда ожидается низкая степень восстановления целевого патогена.

Предупреждения и меры предосторожности

• Назначена для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Указания по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный, легко сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется гель красновато-оранжевого цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 4,5 % масс./об. при 25 °C.
• pH по контролю реакции: 7,3 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Условия хранения и срок годности

• Хранение сухого продукта: при 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение приготовленной среды: при 20–30 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия хранить продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков вследствие гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывать контейнер.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в пределах указанного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов путём автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, необходимо обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Оценка рабочих характеристик

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Сравнительный контекст

В отличие от менее селективных сред, Дезоксихолатный агар допускает использование достаточно больших посевных доз, однако из-за высокой селективности рекомендуется применять его совместно с агаром МакКонки для повышения полноты восстановления целевых патогенов.