Основа агара с цетримидом HiMedia M024-500G (уп/500 гр)

Питательная среда Основа агара с цетримидом HiMedia M024-500G (уп/500 гр) — порошкообразная селективная среда для выделения Pseudomonas aeruginosa, с конечным значением pH 7,2 ± 0,2. Основа агара применяется для анализа воды и клинических образцов, а цетримид подавляет рост многих сопутствующих микроорганизмов, включая часть видов Pseudomonas.

Назначение

Основа агара с цетримидом HiMedia M024-500G рекомендована для селективного выделения Pseudomonas aeruginosa из воды и клинических образцов: мочи, материала из ран, гноя и мокроты. Среда также применяется для исследования косметической продукции, клинических образцов и оценки эффективности дезинфицирующих средств в отношении Pseudomonas aeruginosa.

Среда используется для определения способности выделенных микроорганизмов продуцировать пигменты флюоресцеин и пиоцианин. На среде могут формироваться колонии голубого, сине-зелёного или непигментированного цвета.

Изделие предназначено для применения in vitro и только квалифицированным персоналом.

Технические характеристики

• Полное наименование: Основа агара с цетримидом HiMedia M024-500G
• Производитель: HiMedia
• Артикул: M024-500G
• Тип питательной среды: базовая
• Назначение изделия: агар
• Форма выпуска: порошок
• Происхождение: животное
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Масса упаковки: 500 г
• Сертификат: ФСЗ 2009/03709
• Конечное значение pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,00–7,40
• Концентрация среды для приготовления: 46,7 г/л
• Содержание глицерина при приготовлении: 10 мл на 1000 мл воды
• Условия стерилизации: автоклавирование при 121 °C в течение 15 мин
• Температура охлаждения перед внесением добавки и разливом: 45–50 °C

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Состав

Принцип действия и интерпретация

Pseudomonas aeruginosa хорошо растёт на обычных лабораторных средах, однако для специфического выделения микроорганизма из объектов окружающей среды, а также материалов человека, животных и растений используют среду, содержащую селективный агент и компоненты, усиливающие образование пигментов. Большинство селективных сред основано на естественной устойчивости целевого вида к различным антибактериальным веществам.

Цетримид подавляет рост многих микроорганизмов, одновременно обеспечивая развитие типичных колоний Pseudomonas aeruginosa. Цетримид представляет собой четвертичную аммониевую соль и действует как катионное поверхностно-активное вещество: снижает поверхностное натяжение в месте контакта, а также оказывает осаждающее, комплексообразующее и денатурирующее действие на белки бактериальной мембраны. Цетримид подавляет широкий спектр микроорганизмов, включая виды Pseudomonas, отличные от Pseudomonas aeruginosa.

Среда A, предназначенная для усиления продукции пиоцианина Pseudomonas, разработана King и соавторами. Агар с цетримидом, разработанный Lowbury, представляет собой модификацию технического агара — среды A — с добавлением 0,1 % цетримидa для селективного выделения P. aeruginosa. Позднее, после получения высокоочищенного цетримидa, его концентрация в среде была снижена. Инкубацию проводят при 37 °C в течение 18–24 ч.

P. aeruginosa идентифицируют по характерному образованию пиоцианина — водорастворимого нефлуоресцирующего феназинового пигмента синего цвета — в сочетании с морфологией колоний и характерным виноградоподобным запахом аминоацетофенона. P. aeruginosa является единственным известным видом рода Pseudomonas или грамотрицательной палочкой, продуцирующей пиоцианин. Поэтому среды с цетримидом применяются при идентификации P. aeruginosa.

Желатиновый пептон обеспечивает P. aeruginosa необходимыми питательными веществами. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Хлорид магния и сульфат калия стимулируют образование пиоцианина.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 46,7 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте среду автоклавированием при температуре 121 °C и давлении 15 фунтов (ориентировочно 0,103 МПа) в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. При необходимости асептически добавьте содержимое 1 флакона селективной добавки с налидиксовой кислотой FD130 к 1000 мл среды после регидратации добавки.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Посев и выделение микроорганизмов

Для выделения P. aeruginosa чашки с агаром с цетримидом инокулируют материалом с неселективной среды, например из сердечно-мозгового бульона M210 или соево-казеиновой питательной среды M011.

При достаточно высокой концентрации микроорганизмов исследуемый образец можно непосредственно инокулировать на агар с цетримидом.

Колонии P. aeruginosa могут быть пигментированными — голубыми или сине-зелёными — либо непигментированными. Колонии, демонстрирующие флуоресценцию при 250 нм и сине-зелёную пигментацию, рассматривают как предположительно положительные.

P. aeruginosa может терять флуоресценцию под ультрафиолетовым излучением, если культура непродолжительное время находилась при комнатной температуре. После повторной инкубации чашек флуоресценция появляется вновь. Тип пептона, используемого в основе, также может влиять на образование пигмента.

Ограничения и мешающие факторы

• Некоторые штаммы P. aeruginosa могут не продуцировать пиоцианин.
• Другие виды Pseudomonas не продуцируют пиоцианин, но могут флуоресцировать под ультрафиолетовым излучением.
• Большинство непсевдомонадных видов подавляется агаром с цетримидом; некоторые виды Pseudomonas также могут подавляться.
• Некоторые неферментирующие микроорганизмы и аэробные спорообразующие бактерии могут образовывать на этой среде водорастворимую пигментацию от желтовато-коричневого до коричневого цвета.
• Serratia может образовывать розовую пигментацию.
• Высокая токсичность цетримидa может приводить к слабому росту отдельных штаммов.
• Для подтверждения результатов необходимо выполнить дополнительные биохимические и серологические исследования.
• Для окончательной идентификации результаты по цвету, флуоресценции и морфологии колоний не должны использоваться без подтверждающих тестов.

Типы образцов

• Клинические образцы: моча, материал из ран.
• Образцы воды.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным лабораторным руководствам.

Для образцов воды используйте подходящие методы отбора и обработки проб в соответствии с действующими руководствами и местными нормативными требованиями.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры безопасности

• Изделие предназначено для диагностики in vitro.
• Использовать только