HiMedia M024-100G Основа агара с цетримидом

Основа агара с цетримидом HiMedia M024-100G производства HiMedia — порошковая селективная питательная среда для выделения Pseudomonas aeruginosa из воды и клинических образцов. Применяется в микробиологических лабораториях для селективного культивирования с оценкой пигментообразования; масса упаковки — 100 г, температура хранения — 10–30 °C.

Назначение

Основа агара с цетримидом предназначена для селективного выделения Pseudomonas aeruginosa из:

• клинических образцов — мочи, материала из ран;
• проб воды.

Среда также применяется для исследования косметических средств и клинических образцов на наличие Pseudomonas aeruginosa, а также для оценки эффективности дезинфицирующих средств в отношении этого микроорганизма.

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для обеспечения заявленных рабочих характеристик.

• Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 46,7 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. Нагрейте смесь до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. При необходимости асептически добавьте к 1000 мл среды регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки налидиксовой кислоты FD130.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Pseudomonas aeruginosa хорошо растёт на обычных лабораторных средах, однако для специфического выделения микроорганизма из объектов окружающей среды, а также из образцов человека, животных или растений используют среду, содержащую селективный агент и компоненты, усиливающие образование пигмента. Большинство селективных сред основано на природной устойчивости вида к различным антибактериальным агентам. Цетримид подавляет рост многих микроорганизмов, но позволяет Pseudomonas aeruginosa формировать характерные колонии.

Цетримид представляет собой четвертичную аммониевую соль, действующую как катионное поверхностно-активное вещество. Он снижает поверхностное натяжение в точке контакта и оказывает осаждающее, комплексообразующее и денатурирующее воздействие на белки бактериальной мембраны. Цетримид подавляет широкий спектр микроорганизмов, включая виды Pseudomonas, отличные от Pseudomonas aeruginosa.

King и соавторы разработали среду A для усиления образования пиоцианина бактериями Pseudomonas. Агар с цетримидом, разработанный Lowbury, представляет собой модификацию технического агара — среды A — с добавлением 0,1 % цетримida для селективного выделения P. aeruginosa. После появления высокоочищенного цетримida его концентрацию в среде снизили. Инкубацию проводят при 37 °C в течение 18–24 ч.

P. aeruginosa можно идентифицировать по характерному образованию пиоцианина — синего водорастворимого нефлуоресцирующего феназинового пигмента, а также по морфологии колоний и характерному виноградоподобному запаху аминоацетофенона. P. aeruginosa является единственным известным видом рода Pseudomonas или грамотрицательных палочковидных бактерий, выделяющим пиоцианин. Поэтому среды с цетримидом важны для идентификации P. aeruginosa.

Желатиновый пептон обеспечивает P. aeruginosa необходимыми питательными веществами. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Хлорид магния и сульфат калия стимулируют образование пиоцианина.

Пробоподготовка и посев

Для выделения P. aeruginosa чашки с агаром с цетримидом следует инокулировать материалом с неселективной среды, например с бульона для инфузии мозга и сердца M210 или со среды для переваривания казеина соевых бобов M011.

При высокой концентрации микроорганизмов исследуемую пробу можно непосредственно инокулировать на агар с цетримидом.

Колонии P. aeruginosa могут быть пигментированными — синими или сине-зелёными — либо непигментированными. Колонии, проявляющие флуоресценцию при 250 нм и имеющие сине-зелёную окраску, рассматриваются как предположительно положительные.

P. aeruginosa может утрачивать флуоресценцию под ультрафиолетом, если культуры непродолжительное время находятся при комнатной температуре. После повторной инкубации чашек флуоресценция появляется вновь. Тип пептона, использованного в основе, также может влиять на образование пигмента.

Ограничения и мешающие факторы

• Некоторые штаммы P. aeruginosa могут не образовывать пиоцианин.
• Другие виды Pseudomonas не образуют пиоцианин, но флуоресцируют под ультрафиолетовым светом.
• Большинство непсевдомонадных видов подавляется на агаре с цетримидом; некоторые виды Pseudomonas также могут подавляться.
• Некоторые нефементирующие микроорганизмы и аэробные спорообразующие бактерии могут образовывать на этой среде водорастворимую окраску от желтовато-коричневой до коричневой.
• Serratia может образовывать розовую окраску.
• Среда является селективной; у некоторых штаммов может наблюдаться слабый рост, поскольку цетримид обладает высокой токсичностью.
• Для подтверждения результатов необходимо провести дополнительные биохимические и серологические исследования.

Типы образцов

• Клинические образцы: моча, материал из ран.
• Пробы воды.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов в соответствии с руководствами и местными нормативными требованиями.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Контроль качества

Внешний вид

Кремовый или жёлтый однородный сыпучий порошок.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется гель светло-янтарного цвета с опалесценцией и небольшим осадком.

Реакция

Реакция 4,67%-ного водного раствора с 1 % глицерина при 25 °C.

• pH: 7,2 ± 0,2

Диапазон pH

• pH: 7,00–7,40

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивали после инкубации при 30–35 °C в течение указанного времени. Степень восстановления для роста бактерий на агаре со средой для переваривания казеина соевых бобов принимается за 100 %.