Агар Левина HiMedia M022-500G (уп/500 гр)

Дифференциальная питательная среда Агар Левина HiMedia M022-500G (уп/500 гр) — порошковая среда для выделения, подсчёта и дифференциации представителей семейства Enterobacteriaceae. Агар Левина применяется при анализе клинических и не клинических образцов, пищевых продуктов и воды; конечное значение pH при 25 °C составляет 7,1 ± 0,2.

Назначение

Агар Левина HiMedia M022-500G, также известный как эозин-метиленовый агар (EMB Agar, Levine), предназначен для:

• выделения, подсчёта и дифференциации грамотрицательных микроорганизмов кишечной, или колиформной, группы;
• дифференциации Escherichia coli и Klebsiella aerogenes;
• быстрого выявления Candida albicans в клиническом материале;
• анализа клинических образцов, пищевых продуктов, молочных продуктов и воды.

Среда рекомендована для исследования мочи, фекалий, ротового и вагинального секрета, соскобов с ногтей и кожи, пищевых продуктов и образцов воды.

Изделие имеет сертификат ФСЗ 2009/03705 и предназначено для применения квалифицированным персоналом в лабораторных условиях.

Технические характеристики

Состав

Состав среды, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Агар Левина разработан Levine и применяется для дифференциации Escherichia coli и Klebsiella aerogenes, а также для быстрой идентификации Candida albicans. Среда рекомендована Американской ассоциацией общественного здравоохранения для выявления, подсчёта и дифференциации представителей колиформной группы.

Эозин Y и метиленовый синий придают среде умеренную селективность и подавляют рост некоторых грамположительных бактерий. Красители работают как дифференциальные индикаторы ферментации углеводов и позволяют разделять микроорганизмы, ферментирующие лактозу, и неферментирующие микроорганизмы.

Соотношение эозина и метиленового синего составляет приблизительно 6:1. При снижении pH колиформные микроорганизмы образуют пурпурно-чёрные колонии вследствие поглощения комплекса красителей метиленового синего и эозина. Комплекс красителей абсорбируется колонией. Неферментирующие микроорганизмы, вероятно, повышают pH окружающей среды за счёт окислительного дезаминирования белка; это приводит к растворению комплекса метиленового синего и эозина и образованию бесцветных колоний.

• Пептон служит источником углерода, азота, аминокислот с длинной цепью, витаминов и других необходимых для роста питательных веществ.
• Лактоза является источником энергии и ферментируемым углеводом.
• Эозин Y и метиленовый синий выполняют функцию дифференциальных индикаторов.
• Фосфат выполняет буферную функцию.

Для быстрой идентификации Candida albicans в клинических образцах Weld предложил использовать агар Левина с добавлением гидрохлорида хлортетрациклина. Положительная идентификация Candida albicans возможна через 24–48 ч инкубации при 35–37 °C в атмосфере с содержанием углекислого газа 10 %. Исследовать можно фекалии, ротовой и вагинальный секрет, соскобы с ногтей и кожи. Типичный внешний вид культуры может варьировать.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 37,46 г порошка M022 в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Не допускайте перегревания среды.
5. Охладите среду до 50 °C.
6. Встряхните среду для окисления метиленового синего, то есть для восстановления синего цвета, и суспендирования осадка. Осадок является необходимой частью среды.

Дополнительные указания для варианта основы агара Левина M301:

• растворите 27,5 г порошка M301 в 1000 мл дистиллированной воды;
• перед стерилизацией добавьте соответствующий углевод в основу агара Левина M301.

В локальной инструкции также указана следующая процедура: стерилизация автоклавированием при 1,1 атм и 121 °C в течение 15 мин. Если среда используется в тот же день, её допускается не автоклавировать.

Методика проведения анализа

1. Нанесите исследуемый образец непосредственно штриховым посевом на чашки с приготовленной средой.
2. Инкубируйте посевы, защищая чашки от света.
3. Для получения изолированных колоний соблюдайте стандартные процедуры посева и инкубации.
4. Одновременно с агаром Левина засевайте не селективную питательную среду.
5. Для идентификации выделенных колоний дополнительно проведите подтверждающие тесты.

Типы образцов

• Клинические образцы:
  • моча;
  • фекалии;
  • ротовой секрет;
  • вагинальный секрет;
  • соскобы с ногтей;
  • соскобы с кожи.
• Пищевые продукты.
• Молочные продукты.
• Образцы воды.

Отбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным лабораторным руководствам.

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и подготовки проб согласно действующим методическим руководствам.

Для образцов воды используйте соответствующие методы отбора и подготовки проб согласно руководствам и местным нормативным требованиям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Агар Левина следует использовать одновременно с не селективной питательной средой.
2. Для идентификации выделенных колоний необходимо дополнительно проводить подтверждающие тесты.
3. Некоторые штаммы видов Salmonella и Shigella не растут в присутствии эозина и метиленового синего.
4. Культуральные признаки Candida albicans могут варьировать.

Контроль качества

Внешний вид и свойства среды

• Внешний вид порошка: однородный сыпучий порошок от светло-розового до фиолетового цвета.
• Плотность геля: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: красновато-фиолетовый опалесцирующий гель с зеленоватым оттенком; в чашках Петри образуется мелкодисперсный осадок.
• Реакция: водный раствор концентрацией 3,75 % масса/объём при 25 °C.
• Значение pH водного раствора M022 концентрацией 3,75 % масса/объём при 25 °C: 7,1 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,90–7,30.
• Условия наблюдения культуральных характеристик: инкубация при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.