HiMedia M021S-500G Трехсахарный железный агар

Обезвожденная питательная среда HiMedia M021S-500G Трехсахарный железный агар предназначена для идентификации грамотрицательных кишечных бацилл по ферментации декстрозы, лактозы и сахарозы. Среда применяется для выявления образования H₂S и газообразования, а также дифференциации представителей Enterobacteriaceae, включая Salmonella и Proteus.

Назначение и область применения

Трёхсахарный железный агар (TSI) используют для идентификации грамотрицательных кишечных бацилл на основании ферментации декстрозы, лактозы и сахарозы, а также образования сероводорода.

Среда применяется:

• для идентификации представителей Enterobacteriaceae;
• при микробиологическом исследовании мяса и пищевых продуктов;
• при исследовании молока и молочных продуктов;
• для подтверждения присутствия Salmonella при испытаниях на микробиологические пределы;
• для идентификации грамотрицательных бацилл;
• для обнаружения Escherichia coli;
• для обнаружения представителей рода Vibrio.

Среду TSI рекомендуется использовать параллельно с мочевинным агаром или бульоном — Urea Agar / Broth M112/M111 — для дифференциации видов Salmonella и Proteus.

Состав

Состав среды на 1 л:

• Масса обезвоженной среды для приготовления 1 л: 64,32 г
• Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2
• Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных показателей эффективности среды.

Принцип измерения и интерпретация

Среда была первоначально предложена Sulkin и Willett, а затем модифицирована Hajna для идентификации Enterobacteriaceae. Рецептура учитывает рекомендации APHA при исследовании мяса и пищевых продуктов, молока и молочных продуктов, при проведении испытаний на микробиологические пределы для подтверждения присутствия Salmonella, а также при идентификации грамотрицательных бацилл. Комитет ISO и BIS рекомендовали незначительную модификацию среды для идентификации Salmonella. BIS рекомендует среду M021S для обнаружения Escherichia coli и представителей рода Vibrio.

Функции компонентов среды:

• пептон, дрожжевой и мясной экстракты обеспечивают азотистые соединения, серу, микроэлементы и витамины группы B;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• лактоза, сахароза и глюкоза являются ферментируемыми углеводами;
• тиосульфат натрия и ионы трёхвалентного или двухвалентного железа образуют индикаторную систему для выявления H₂S;
• феноловый красный служит индикатором pH.

Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу, образуют различные кислоты, из-за чего цвет среды изменяется с красного на жёлтый. В столбике среды образуется больше кислот в результате ферментации, чем в скошенной части, где преобладают процессы дыхания.

Растущие бактерии также образуют щелочные продукты при окислительном декарбоксилировании пептона. Эти щелочные продукты нейтрализуют большое количество кислоты в столбике среды. Поэтому появление щелочной, красной скошенной части и кислого, жёлтого столбика после инкубации указывает, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не способен ферментировать лактозу и/или сахарозу.

Бактерии, ферментирующие лактозу или сахарозу, либо оба углевода одновременно, дополнительно к глюкозе образуют большое количество кислоты. В этой области реверсия pH невозможна, поэтому скошенная часть и столбик среды остаются кислыми и приобретают жёлтый цвет.

Образование газа выявляют по наличию трещин или пузырьков в среде, возникающих при выходе накопившегося газа. Газообразование обозначают как образование CO₂.

Тиосульфат восстанавливается до сероводорода несколькими видами бактерий. H₂S взаимодействует с ионами железа солей железа с образованием нерастворимого чёрного осадка сульфида железа. Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде, поэтому почернение обычно наблюдается в столбике среды.

Некоторые представители Enterobacteriaceae и некоторые продуцирующие H₂S штаммы Salmonella могут не давать положительной реакции на H₂S на агаре TSI. Отдельные бактерии способны образовывать H₂S на железном агаре Клиглера, но не на агаре TSI. Это может происходить вследствие того, что утилизация сахарозы в агаре TSI подавляет ферментативный путь, приводящий к образованию H₂S.

Сводная интерпретация реакций

• Щелочная скошенная часть / кислый столбик: ферментируется только глюкоза.
• Кислая скошенная часть / кислый столбик: ферментируются глюкоза и сахароза, либо глюкоза и лактоза, либо все три сахара — глюкоза, лактоза и сахароза.
• Наличие пузырьков или трещин: образование газа.
• Наличие чёрного осадка: образование газа H₂S.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 64,32 г обезвоженной среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте и распределите среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Дайте среде застыть в скошенной форме, сформировав столбик длиной около 1″ (25,4 мм).

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый однородный сыпучий порошок.

Желирование

Плотное желе, сопоставимое с 1,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скосов образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель розовато-красного цвета.

Реакция

Реакция 6,43%-ного водного раствора при 25 °C:

• pH: 7,4 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.