HiMedia M021S-100G Трехсахарный железный агар

Дифференциально-диагностическая питательная среда HiMedia M021S-100G Трехсахарный железный агар производства HiMedia предназначена для идентификации грамотрицательных кишечных бацилл по ферментации декстрозы, лактозы и сахарозы и образованию сероводорода. Среда применяется для микробиологического анализа пищевых продуктов, мяса, молока и молочных продуктов, подтверждения наличия Salmonellae и дифференциации Salmonella и Proteus; поставляется в виде порошка массой 100 г.

Назначение и область применения

Трехсахарный железный агар используется для идентификации грамотрицательных кишечных бацилл на основании следующих признаков:

• ферментация декстрозы;
• ферментация лактозы;
• ферментация сахарозы;
• образование сероводорода (H₂S);
• образование газа;
• изменение реакции среды в скошенной части и столбике агара.

Среда применяется:

• для исследования мяса и пищевых продуктов;
• для исследования молока и молочных продуктов;
• для микробиологического предельного теста с целью подтверждения наличия Salmonellae;
• для идентификации грамотрицательных бацилл;
• для выявления Escherichia coli и Vibrio s в соответствии с рекомендациями BIS;
• совместно с мочевинным агаром или бульоном для дифференциации Salmonella и Proteus.

Среда соответствует рекомендациям APHA по исследованию мяса, пищевых продуктов, молока и молочных продуктов, а также используется в вариантах методики, рекомендованных ISO и BIS для идентификации Salmonellae. BIS рекомендует среду M021S для выявления Escherichia coli и Vibrio s.

Состав

Расход сухой среды: 64,32 г/л.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Трехсахарный железный агар первоначально предложен Sulkin и Willett и модифицирован Hajna для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae.

Пептон, дрожжевой экстракт и мясной экстракт обеспечивают среду азотистыми соединениями, серой, микроэлементами и витаминами группы B. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие. Лактоза, сахароза и глюкоза являются ферментируемыми углеводами. Тиосульфат натрия и ионы железа обеспечивают индикаторную систему для выявления H₂S. Феноловый красный служит индикатором pH.

Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу, образуют различные кислоты, вследствие чего цвет среды изменяется с красного на жёлтый. В столбике агара при ферментации выделяется больше кислот, чем в скошенной части, где преобладают процессы дыхания. Растущие бактерии также образуют щелочные продукты в результате окислительного декарбоксилирования пептона. Эти щелочные продукты нейтрализуют большое количество кислоты, присутствующей в столбике.

Щелочная реакция скошенной части, сохраняющей красный цвет, и кислая реакция столбика, приобретающего жёлтый цвет, после инкубации указывают, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не способен ферментировать лактозу и/или сахарозу.

Бактерии, ферментирующие лактозу или сахарозу либо оба углевода одновременно, дополнительно к глюкозе образуют большое количество кислоты. В этой области реверсия pH невозможна, поэтому скошенная часть и столбик среды имеют кислую реакцию и жёлтый цвет.

Образование газа выявляют по трещинам или пузырькам в среде, возникающим при выходе накопившегося газа. Тиосульфат восстанавливается некоторыми видами бактерий до сероводорода. H₂S взаимодействует с ионами железа железосодержащих солей с образованием нерастворимого чёрного осадка сульфида железа. Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде, поэтому почернение обычно наблюдается в столбике пробирки.

Некоторые представители Enterobacteriaceae и некоторые продуцирующие H₂S штаммы Salmonella могут не давать положительной реакции на H₂S на трёхсахарном железном агаре. Отдельные бактерии могут образовывать H₂S на железном агаре Клиглера, но не на трёхсахарном железном агаре. Это возможно вследствие того, что утилизация сахарозы в трёхсахарном железном агаре подавляет ферментативный путь, приводящий к образованию H₂S.

Сводная интерпретация реакций

• Щелочная скошенная часть / кислый столбик: ферментируется только глюкоза.
• Кислая скошенная часть / кислый столбик: ферментируются глюкоза и сахароза, либо глюкоза и лактоза, либо все три сахара — глюкоза, лактоза и сахароза.
• Наличие пузырьков или трещин: образование газа.
• Наличие чёрного осадка: образование газа H₂S.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию 64,32 г сухой среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте приготовленную среду.
4. Распределите среду по пробиркам.
5. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (примерно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
6. Дайте среде застыть в наклонном положении, сформировав скошенную часть и столбик длиной около 25,4 мм (1″).

Технические характеристики

• Наименование: Трехсахарный железный агар.
• Модель/артикул: M021S-100G.
• Производитель: HiMedia.
• Назначение изделия: агар.
• Форма выпуска: порошок.
• Масса: 100 г.
• Тип продукта: стандартный.
• Тип упаковки: HDPE (полиэтилен высокой плотности).
• Происхождение: животное.
• Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2.
• Реакция водного раствора: 6,43 % масс./об. при 25 °C.
• Условия хранения сухой среды: ниже 30 °C, в плотно закрытом контейнере.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок светло-жёлтого или розового цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенного агара образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель розовато-красного цвета.

Реакция среды

Реакция 6,43%-ного водного раствора при 25 °C:

• pH: 7,4 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики M021S определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.