HiMedia M021I-500G Трехсахарный железный агар

Сухая питательная среда HiMedia M021I-500G Трехсахарный железный агар для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae, в частности видов Salmonella. Применяется для анализа пищевых продуктов и молочной продукции; состав и критерии эффективности соответствуют стандартам ISO 6579-1:2017/Amd.1:2020(E), ISO 21567:2004 и APHA.

Принцип измерения и интерпретация

Трехсахарный железный агар (TSI) предназначен для идентификации грамотрицательных бацилл. Пептон, дрожжевой экстракт и мясной экстракт обеспечивают азотистые соединения, серу, микроэлементы и витамины группы B. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс. В качестве ферментируемых углеводов используются лактоза, сахароза и декстроза (глюкоза).

Индикаторная система на основе тиосульфата натрия и ионов железа позволяет определить продукцию H₂S. Феноловый красный служит pH-индикатором.

Интерпретация результатов:

• Щелочной скос (красный) / кислый столбик (желтый): ферментация только глюкозы.
• Кислый скос (желтый) / кислый столбик (желтый): ферментация глюкозы и сахарозы, либо глюкозы и лактозы, либо всех трех сахаров.
• Пузырьки или трещины в среде: продукция газа (CO₂).
• Черный осадок: продукция сероводорода (H₂S), который в кислой среде взаимодействует с солями железа, образуя нерастворимый сульфид железа.

Для дифференциации видов Salmonella и Proteus рекомендуется использовать TSI-агар параллельно с агаром или бульоном с мочевиной (M112/M111).

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Растворите 64,62 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Тщательно перемешайте и разлейте по пробиркам.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут. Примечание: для улучшения результатов возможна стерилизация при 115 °C (давление $\approx$0,07 МПа / 10 psi) в течение 15 минут.
5. Охладите среду, сформировав скос с глубиной столбика примерно 2,5–5 см.

Процедура исследования

Согласно ISO 6579-1:2017/Amd.1:2020(E):

1. Отметьте подозрительные колонии на каждой чашке.
2. Пересейте выбранные колонии на поверхность неселективной агарной среды.
3. Инкубируйте при 34–38 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч.
4. Пересейте выбранную колонию на скос TSI-агара и проведите укол в столбик.
5. Инкубируйте при 34–38 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч.

Согласно ISO 21567:2004:

1. Пересейте выбранные колонии на чашки с питательным агаром.
2. Инкубируйте при 37 $\pm$ 1 °C в течение 18–24 ч.
3. Выполните укол в столбик и посев на скос TSI-агара.
4. Инкубируйте при 37 $\pm$ 1 °C в течение 24 $\pm$ 3 ч.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Вариант согласно ISO 6579-1:2017 и ISO 21567:2004:

Вариант Triple Sugar Iron Agar M0211:

Общие параметры

• pH после стерилизации (при 25 °C): 7,4 $\pm$ 0,2
• Конечный pH (при 25 °C): 7,4 $\pm$ 0,2
• Внешний вид: светло-желтый или розовый однородный свободнотекущий порошок
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,2% агаром
• Цвет и прозрачность готовой среды: розово-красный прозрачный или слегка опалесцирующий гель
• Происхождение компонентов: животное
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Ограничения применения

1. Некоторые представители Enterobacteriaceae и продуцирующие H₂S виды Salmonella могут давать отрицательную реакцию на H₂S на TSI-агаре.
2. Некоторые бактерии могут продуцировать H₂S на агаре Клиглера, но не на TSI-агаре. Это происходит из-за того, что утилизация сахарозы в TSI-агаре подавляет ферментативный путь, приводящий к продукции H₂S.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

При работе со средой и культурами следует использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица, соблюдая надлежащую микробиологическую лабораторную практику. Утилизация использованных или непригодных препаратов должна осуществляться путем автоклавирования и/или сжигания в соответствии с установленными процедурами по обращению с инфекционными материалами.