HiMedia M021I-500G Трехсахарный железный агар

Агар HiMedia M021I-500G «Трехсахарный железный агар» производства HiMedia — сухая питательная среда для биохимической идентификации представителей Enterobacteriaceae, особенно видов Salmonella. Применяется при исследовании пищевых и молочных продуктов; после стерилизации среда имеет pH 7,4 ± 0,2 и используется в виде скошенного агара со столбиком глубиной около 2,5–5 см.

Назначение

Трехсахарный железный агар рекомендован для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae, особенно видов Salmonella. Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 6579-1:2017/Amd.1:2020(E) и ISO 21567:2004; также среда применяется в методиках APHA.

Тип образца: пищевые продукты и молочные продукты.

Состав

Состав по ISO 6579-1:2017 и ISO 21567:2004

Содержание компонентов указано в г/л.

Состав трёхсахарного железного агара M0211

Содержание компонентов указано в г/л.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик среды.

# Эквивалент мясного экстракта.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 64,62 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте и распределите среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин; давление 15 фунтов составляет приблизительно 0,10 МПа.
5. Дайте среде застыть в скошенном виде, сформировав столбик глубиной около 2,5–5 см.

Для получения лучших результатов среду можно стерилизовать автоклавированием при температуре 115 °C в течение 15 мин; давление 10 фунтов составляет приблизительно 0,069 МПа.

Принцип действия и интерпретация

Трехсахарный железный агар первоначально предложен Sulkin и Willett и модифицирован Hajna для идентификации представителей Enterobacteriaceae. Среда используется согласно рекомендациям APHA при исследовании мяса и пищевых продуктов, молока и молочных продуктов, при микробиологическом предельном испытании для подтверждения присутствия Salmonella, а также при идентификации грамотрицательных палочек и по методике FDA BAM. Комитет ISO рекомендовал небольшую модификацию исходной среды для идентификации Salmonella.

Функции компонентов:

• пептон, дрожжевой экстракт и экстракт HM обеспечивают азотистые соединения, серу, микроэлементы и витамины группы B;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• лактоза, сахароза и декстроза (глюкоза) являются ферментируемыми углеводами;
• тиосульфат натрия и ионы железа образуют индикаторную систему для выявления H₂S;
• феноловый красный служит индикатором pH.

Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу, образуют различные кислоты, вследствие чего цвет среды изменяется с красного на жёлтый. В столбике при ферментации выделяется больше кислот, чем на скошенной поверхности, где преобладают процессы дыхания. Растущие бактерии также образуют щелочные продукты в результате окислительного декарбоксилирования пептона. Эти щелочные продукты нейтрализуют большое количество кислоты, присутствующей в столбике.

Щелочная скошенная поверхность красного цвета и кислый жёлтый столбик после инкубации указывают, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не способен ферментировать лактозу и/или сахарозу. Бактерии, ферментирующие лактозу или сахарозу, либо оба углевода одновременно с глюкозой, образуют большое количество кислоты. В соответствующей области pH не возвращается к исходному значению, поэтому скошенная поверхность и столбик приобретают кислую реакцию.

Образование газа выявляют по трещинам или пузырькам в среде, возникающим при выходе накопившегося газа. Некоторые виды бактерий восстанавливают тиосульфат до сероводорода. Сероводород реагирует с ионами железа(III) солей железа с образованием нерастворимого чёрного осадка сульфида железа(II). Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде, поэтому почернение обычно наблюдается в столбике пробирки.

Трехсахарный железный агар следует использовать параллельно с мочевинным агаром или бульоном [M112/M111] для дифференциации видов Salmonella и Proteus.

Интерпретация реакций:

• щелочная скошенная поверхность и только кислый столбик — ферментация глюкозы;
• кислая скошенная поверхность и кислый столбик — ферментация глюкозы и сахарозы, глюкозы и лактозы либо всех трёх сахаров: глюкозы, лактозы и сахарозы;
• пузырьки или трещины — образование газа;
• чёрный осадок — образование H₂S.

Подготовка и обработка образцов

Обработка по ISO 6579-1:2017/Amd.1:2020(E)

1. Отметьте подозрительные колонии на каждой чашке.
2. Пересевайте выбранные колонии на поверхность неселективной агаризованной среды.
3. Инкубируйте чашки при 34–38 °C в течение 24 ч ± 3 ч.
4. Пересевайте выбранную колонию на скошенную поверхность трехсахарного железного агара для биохимического подтверждения и выполняйте посев уколом в столбик.
5. Инкубируйте при температуре 34–38 °C в течение 24 ч ± 3 ч.

Обработка по ISO 21567:2004

1. Пересевайте выбранные колонии на поверхность чашек с питательным агаром.
2. Инкубируйте чашки при температуре 37 ± 1 °C в течение 18–24 ч.
3. Выполняйте посев уколом в столбик трехсахарного железного агара и штриховой посев на скошенную поверхность.
4. Инкубируйте при температуре 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.

Контроль качества

Ожидаемые характеристики среды:

• Внешний вид: однородный, сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,2%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в пробирках в виде скошенного агара образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель розовато-красного цвета.
• Реакция: реакция 6,45%-ного водного раствора при 25 °C; pH 7,4 ± 0,2.
• pH: 7,20–7,60.
• Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2.
• pH после стерилизации при 25 °C: 7,4 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.