HiMedia M021I-100G Трехсахарный железный агар

Питательная микробиологическая среда HiMedia M021I-100G «Трехсахарный железный агар» производства HiMedia представляет собой сухой порошок массой 100 г. Среда предназначена для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae, особенно видов Salmonella, при хранении в диапазоне 10–30 °C.

Назначение

Трехсахарный железный агар рекомендуется для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae, особенно видов Salmonella. Тип образцов: пищевые продукты и молочные продукты.

Состав и показатели эффективности среды соответствуют требованиям ISO 6579-1:2017/Amd.1:2020(E), ISO 21567:2004 и рекомендациям APHA, применяемым к соответствующим методикам микробиологического анализа.

Состав

Формула по ISO 6579-1:2017 и ISO 21567:2004

Содержание компонентов:

Формула Triple Sugar Iron Agar M0211

Формула скорректирована и стандартизирована для достижения установленных показателей эффективности.

Экстракт HiMedia эквивалентен мясному экстракту.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 64,62 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте и распределите среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Дайте среде застыть в наклонном положении, сформировав столбик глубиной около 2,5–5 см.

Для получения лучших результатов допускается стерилизация автоклавированием при давлении 10 фунтов на квадратный дюйм и температуре 115 °C в течение 15 мин.

Принцип действия и интерпретация

Трехсахарный железный агар первоначально предложен Sulkin и Willett и позднее модифицирован Hajna для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae. Среда соответствует рекомендациям APHA для исследования мяса и мясных продуктов, молока и молочных продуктов, проведения микробиологического предельного испытания для подтверждения присутствия Salmonella, а также идентификации грамотрицательных бацилл и положениям FDA BAM. Комитет ISO рекомендовал небольшую модификацию исходной среды для идентификации Salmonella.

Функции компонентов среды:

• пептон, дрожжевой экстракт и экстракт HM обеспечивают среду азотистыми соединениями, соединениями серы, микроэлементами и витаминами группы B;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• лактоза, сахароза и декстроза (глюкоза) являются ферментируемыми углеводами;
• тиосульфат натрия и ионы железа формируют индикаторную систему для выявления H₂S;
• феноловый красный используется как индикатор pH;
• агар формирует плотную питательную среду.

Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу, образуют различные кислоты, вследствие чего цвет среды изменяется с красного на жёлтый. При ферментации в столбике образуется больше кислот, чем в скошенной части, где преобладают процессы дыхания.

Растущие бактерии также образуют щелочные продукты в результате окислительного декарбоксилирования пептона. Эти щелочные продукты нейтрализуют значительное количество кислоты, присутствующей в столбике среды. Поэтому щелочная скошенная часть красного цвета и кислая жёлтая реакция в столбике после инкубации указывают, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не способен ферментировать лактозу и/или сахарозу.

Бактерии, ферментирующие лактозу или сахарозу либо оба углевода одновременно, дополнительно к глюкозе образуют большое количество кислоты. В соответствующей области среды изменения pH не возвращаются к исходным значениям, поэтому формируется кислая реакция как в скошенной части, так и в столбике.

Образование газа выявляют по наличию трещин или пузырьков в среде, возникающих при выходе накопившегося газа.

Несколько видов бактерий восстанавливают тиосульфат до сероводорода. Сероводород взаимодействует с ионами железа(III) железосодержащих солей с образованием нерастворимого чёрного осадка сульфида железа(II). Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде, поэтому почернение обычно наблюдается в столбике пробирки.

Трехсахарный железный агар следует использовать параллельно с мочевинным агаром или мочевинным бульоном для дифференциации видов Salmonella и Proteus.

Интерпретация реакций

• Щелочная скошенная часть / кислый столбик: ферментируется только глюкоза.
• Кислая скошенная часть / кислый столбик: ферментируются глюкоза и сахароза, глюкоза и лактоза либо все три сахара — глюкоза, лактоза и сахароза.
• Наличие пузырьков или трещин: образование газа.
• Наличие чёрного осадка: образование H₂S.

Методика работы с образцами

Обработка по ISO 6579-1:2017/Amd.1:2020(E)

1. Отметьте подозрительные колонии на каждой чашке.
2. Пересеките выбранные колонии на поверхности неселективной агаризованной среды.
3. Инкубируйте чашки при 34–38 °C в течение 24 ч ± 3 ч.
4. Пересеките выбранную колонию на скошенной поверхности трёхсахарного железного агара (TSI) для биохимического подтверждения.
5. Выполните посев проколом в столбик среды.
6. Инкубируйте при температуре от 34 до 38 °C в течение 24 ч ± 3 ч.

Обработка по ISO 21567:2004

1. Пересеките выбранные колонии на поверхности чашек с питательным агаром.
2. Инкубируйте чашки при 37 ± 1 °C в течение 18–24 ч.
3. Выполните посев проколом в столбик TSI-агара.
4. Пересеките скошенную поверхность агара.
5. Инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый однородный сыпучий порошок.

Желирование

Плотный гель, сопоставимый с 1,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенной среды образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель розовато-красного цвета.

Реакция среды

Реакция 6,45%-ного водного раствора при 25 °C: pH 7,4 ± 0,2.

Значение pH

pH: 7,20–7,60.

Конечное значение pH

Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.