HiMedia M021I-100G Трехсахарный железный агар

Сухая питательная среда HiMedia M021I-100G Трехсахарный железный агар для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae, в частности видов Salmonella. Состав и критерии эффективности среды соответствуют спецификациям ISO 6579-1:2017/Amd.1:2020(E), ISO 21567:2004 и APHA.

Принцип измерения и интерпретация

Трехсахарный железный агар (TSI) предназначен для дифференциации грамотрицательных бацилл. Пептон, дрожжевой экстракт и мясной экстракт обеспечивают азотистые соединения, серу, микроэлементы и витамины группы B. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс. В качестве ферментируемых углеводов используются лактоза, сахароза и декстроза (глюкоза).

Индикационная система основана на использовании фенолового красного (индикатор pH) и системы из тиосульфата натрия и ионов железа (индикатор H₂S).

Интерпретация результатов:

• Щелочной скос (красный) / кислый столбик (жёлтый): ферментация только глюкозы.
• Кислый скос (жёлтый) / кислый столбик (жёлтый): ферментация глюкозы и сахарозы, глюкозы и лактозы или всех трёх сахаров.
• Пузырьки или трещины в среде: продукция газа (CO₂).
• Чёрный осадок: продукция сероводорода (H₂S). Тиосульфат восстанавливается до H₂S, который взаимодействует с ионами железа, образуя нерастворимый сульфид железа (черный осадок), обычно в столбике пробирки в кислой среде.

Для дифференциации видов Salmonella и Proteus среду TSI следует использовать параллельно с мочевинным агаром или бульоном (M112/M111).

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Растворить 64,62 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Тщательно перемешать и разлить по пробиркам.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,07 МПа / 15 lbs) в течение 15 минут. Примечание: Для улучшения результатов возможна стерилизация при 115 °C (давление ≈0,06 МПа / 10 lbs) в течение 15 минут.
5. Охладить среду, сформировав скос с глубиной столбика примерно 2,5–5 см.

Процедура анализа

Согласно ISO 6579-1:2017/Amd.1:2020(E):

1. Отметить подозрительные колонии на каждой чашке.
2. Посеять выбранные колонии на поверхность неселективной агарной среды.
3. Инкубировать при 34–38 °C в течение 24 ± 3 ч.
4. Посеять выбранную колонию на среду TSI: нанести штрих на скос и произвести укол в столбик.
5. Инкубировать при 34–38 °C в течение 24 ± 3 ч.

Согласно ISO 21567:2004:

1. Посеять выбранные колонии на чашки с питательным агаром.
2. Инкубировать при 37 ± 1 °C в течение 18–24 ч.
3. Произвести укол в столбик и штрих по скосу среды TSI.
4. Инкубировать при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Вариант согласно ISO 6579-1:2017 и ISO 21567:2004:

Вариант Triple Sugar Iron Agar M0211:

Физико-химические свойства

• pH после стерилизации (при 25 °C): 7,4 ± 0,2
• Конечный pH (при 25 °C): 7,4 ± 0,2
• Внешний вид: светло-жёлтый или розовый гомогенный свободнотекущий порошок
• Желирование: плотное, сопоставимо с 1,2 % агаровым гелем
• Цвет и прозрачность готовой среды: розово-красный прозрачный или слегка опалесцирующий гель

Общие параметры

Область применения

Среда используется для анализа пищевых продуктов и молочной продукции. Применяется в микробиологических лабораториях для подтверждения присутствия Salmonella и идентификации грамотрицательных бацилл.

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Ограничения применения

1. Некоторые представители Enterobacteriaceae и продуцирующие H₂S виды Salmonella могут давать отрицательный результат по H₂S на агаре TSI.
2. Некоторые бактерии могут продуцировать H₂S на агаре Клиглера, но не на агаре TSI, так как утилизация сахарозы в TSI может подавлять ферментативный путь продукции H₂S.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать для предотвращения образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

При работе со средой и культурами использовать защитные перчатки, спецодежду и средства защиты глаз/лица. Соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности. Утилизация: использованные или непригодные препараты подлежат безопасному уничтожению путем автоклавирования и/или сжигания в соответствии с лабораторными протоколами по обращению с инфекционными материалами.